SOCS2表達(dá)與卵巢癌鉑類耐藥相關(guān)性的研究.pdf

1、卵巢癌是發(fā)病率第二位的女性生殖器惡性腫瘤,但死亡率居?jì)D科惡性腫瘤之首。卵巢癌的高發(fā)年齡段在40~70歲之間。發(fā)病率占婦科惡性腫瘤的22.9％,僅次于宮頸癌,并以每年1％的速度遞增。由于缺乏特異的臨床癥狀和相應(yīng)的早期診斷手段,患者僅在出現(xiàn)腹部疼痛,消化道癥狀時(shí)才就診,初診時(shí)2/3已屬晚期。手術(shù)常難徹底根除腫瘤,故以紫杉醇聯(lián)合鉑類化療在卵巢癌綜合治療中占有重要地位,但是腫瘤細(xì)胞的原發(fā)性或繼發(fā)性耐藥是影響化療效果,造成腫瘤復(fù)發(fā)的主要原因。使患

2、者術(shù)后的五年生存率僅為20％~30％。若想提高卵巢癌患者的治愈率,明確耐藥相關(guān)分子機(jī)制,尋找有效的耐藥逆轉(zhuǎn)劑和治療靶標(biāo)是當(dāng)務(wù)之急,這對(duì)提高卵巢癌化療敏感性,逆轉(zhuǎn)耐藥,調(diào)整治療方案具有重要的意義。近年來(lái)發(fā)現(xiàn)一類依賴細(xì)胞因子的負(fù)性調(diào)控蛋白,細(xì)胞因子信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)抑制因子SOCS家族。該家族主要通過(guò)對(duì)JAK/STAT信號(hào)通路的負(fù)反饋調(diào)節(jié)發(fā)揮生物學(xué)功能。JAK/STAT途徑參與多種細(xì)胞因子,生長(zhǎng)因子和激素的轉(zhuǎn)導(dǎo)達(dá)到調(diào)節(jié)細(xì)胞的生長(zhǎng),增殖,分化和凋亡的目

3、的。近年來(lái)發(fā)現(xiàn)JAK/STAT信號(hào)通路參與多種腫瘤的發(fā)生,發(fā)展。SOCS家族則是通過(guò)負(fù)反饋調(diào)節(jié)該通路而抑制細(xì)胞異常增殖,促進(jìn)細(xì)胞凋亡。該實(shí)驗(yàn)通檢測(cè)卵巢癌順鉑敏感株A2780細(xì)胞、順鉑耐藥株CP70細(xì)胞中SOCS2的表達(dá),探討SOCS2與卵巢癌鉑類耐藥的關(guān)系。應(yīng)用甲基化酶抑制后兩種卵巢癌細(xì)胞中SOCS2的變化及對(duì)化療藥物的敏感性。探討SOCS2在卵巢癌細(xì)胞耐藥中可能起到的作用,觀測(cè)SOCS2蛋白表達(dá)升高后CP70細(xì)胞對(duì)順鉑化療敏感性的改變

4、。為逆轉(zhuǎn)卵巢癌鉑類耐藥提供具有臨床應(yīng)用價(jià)值的依據(jù)。
　　研究目的：
　　1.探討SOCS2基因表達(dá)與卵巢癌鉑類耐藥的相關(guān)性及其在卵巢癌鉑類耐藥中的可能機(jī)制。
　　2.探討A2780和CP70細(xì)胞SOCS2基因的甲基化狀態(tài)。探究應(yīng)用甲基化酶抑制劑后SOCS2的表達(dá)變化及其對(duì)順鉑耐藥性影響。
　　3.pEGFP-N1-SOCS2瞬時(shí)轉(zhuǎn)染增加SOCS2蛋白表達(dá)后卵巢癌細(xì)胞對(duì)順鉑耐藥性的改變及其可能作用機(jī)制。
　　

5、研究?jī)?nèi)容和方法：
　　1.RT-PCR、western bloting、免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)卵巢癌順鉑敏感株A2780細(xì)胞、順鉑耐藥株CP70細(xì)胞中SOCS2的mRNA和蛋白表達(dá)及定位;western bloting、免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)順鉑處理后A2780和CP70細(xì)胞中SOCS2蛋白表達(dá)及定位的變化,分析SOCS2表達(dá)與卵巢癌鉑類耐藥的相關(guān)性。
　　2.甲基化實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)A2780和CP70細(xì)胞SOCS2基因的甲基化狀態(tài)。

6、RT-PCR, western bloting、免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測(cè)甲基化酶抑制劑5-Aza-CdR處理A2780與CP70細(xì)胞后SOCS2的mRNA和蛋白表達(dá)。MTT法檢測(cè)藥物處理后兩種細(xì)胞對(duì)順鉑敏感性的改變。
　　3.MTT法檢測(cè)pEGFP-N1-SOCS2瞬時(shí)轉(zhuǎn)染CP70細(xì)胞增加SOCS2蛋白表達(dá)后CP70細(xì)胞對(duì)順鉑敏感性的改變;TUNEL法檢測(cè)增加SOCS2蛋白表達(dá)后,順鉑誘導(dǎo)CP70細(xì)胞凋亡改變的狀況。
　　研究結(jié)果

7、：
　　1.A2780細(xì)胞的SOCS2基因和蛋白表達(dá)水平較CP70細(xì)胞高,在A2780細(xì)胞與CP70細(xì)胞中均呈漿表達(dá)。順鉑處理A2780和CP70細(xì)胞后,兩種細(xì)胞中SOCS2蛋白表達(dá)均呈時(shí)間和劑量依賴性降低。
　　2.A2780和CP70細(xì)胞SOCS2基因都有不同程度的甲基化改變。應(yīng)用不同劑量的甲基化酶抑制劑處理兩種細(xì)胞后,A2780與CP70細(xì)胞中SOCS2的蛋白表達(dá)呈現(xiàn)劑量依賴性增高,并呈現(xiàn)核漿共表達(dá)狀態(tài)。對(duì)順鉑的敏感性

8、均增強(qiáng)。
　　3.感染pEGFP-N1-SOCS2后,CP70細(xì)胞對(duì)順鉑的敏感性有待進(jìn)一步探討。
　　結(jié)論：
　　1.SOCS2在順鉑敏感細(xì)胞和耐藥細(xì)胞中表達(dá)強(qiáng)度不同,順鉑誘導(dǎo)后兩種卵巢癌細(xì)胞SOCS2蛋白表達(dá)呈時(shí)間和劑量依賴性減弱,提示SOCS2在卵巢癌順鉑耐藥機(jī)制形成中發(fā)揮重要作用。
　　2.A2780和CP70細(xì)胞SOCS2的低表達(dá)可能與其啟動(dòng)子CpG島的甲基化狀態(tài)有關(guān),去甲基化后,SOCS2蛋白表達(dá)明顯升