腎透明細(xì)胞癌miRNAs、Notch1和Hes1的表達(dá)及意義.pdf

1、第一部分：miRNAs在腎透明細(xì)胞癌組織中的表達(dá)及意義
　　 目的：通過檢測候選miRNAs在腎透明細(xì)胞癌患者癌組織和癌旁組織中的表達(dá)情況，并分析其與腫瘤分期、病理分級等臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系，探討miRNAs在。腎透明細(xì)胞癌發(fā)生、發(fā)展過程中的作用及其在腎透明細(xì)胞癌診斷、治療、預(yù)后判斷等方面的意義。
　　 方法：收集自2009年9月～2011年1月在南昌大學(xué)第一附屬醫(yī)院泌尿外科行腎癌切除術(shù)患者的組織塊(癌組織和其癌旁組織

2、)保存于液氮中。取術(shù)后病理切片證明病理分型為腎透明細(xì)胞癌的病理組織共計(jì)20例。采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢測腎透明細(xì)胞癌患者癌組織與癌旁組織中miRNA-20b、-21、-34a、-210、-141、-200c、200b、-514、-532-5p的表達(dá)變化。數(shù)據(jù)采用2-△△CT法進(jìn)行分析，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件對實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行配對樣本t檢驗(yàn)和兩樣本t檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)

3、果：miRNA-142-5p在癌組織與癌旁組織中均無擴(kuò)增；與癌旁組織相比，腎透明細(xì)胞癌患者癌組織中miRNA-21、-34a、-210呈高表達(dá)(<0.05)，miRNA-141、-200c呈低表達(dá)(P<0.05)，miRNA-20b、-200b、-514、-532-5p則無差異。miRNA-34a隨著腎癌病理分級的增高而增高。
　　 結(jié)論：在腎透明細(xì)胞癌中，存在差異表達(dá)的miRNAs，其中miRNA-21、-34a、-210高表

4、達(dá)，miRNA-141、-200c低表達(dá)，提示差異表達(dá)的miRNA在腎透明細(xì)胞癌中具有重要的作用。
　　 第二部分：差異表達(dá)的miRNA的靶基因預(yù)測分析
　　 目的：采用生物信息學(xué)的方法，對差異表達(dá)的miRTA進(jìn)行靶基因預(yù)測分析，探討差異表達(dá)的miRNA通過其靶基因在腎透明細(xì)胞癌發(fā)生發(fā)展過程中的可能作用。
　　 方法：采用targetScan(http：//www.targetscan.org)、PicTar(h

5、ttp：//picTar.mdc-berlin.de)、miRanda(http：//microrna.sanger.ac.uk)miRDB(http：//miRNAdb。org/miRDB)4個(gè)軟件在線預(yù)測差異表達(dá)miRNAs靶基因，并將在腎癌中出現(xiàn)的靶基因結(jié)合genbank數(shù)據(jù)庫進(jìn)行分析。
　　 結(jié)果：靶基因預(yù)測分析的結(jié)果顯示，miRNAs調(diào)節(jié)的靶基因范圍非常廣泛，涉及細(xì)胞周期、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)，細(xì)胞增殖、細(xì)胞凋亡、細(xì)胞分化等各個(gè)方

6、面。其中與腎癌相關(guān)的靶基因：miRNA-21(4個(gè))，miRNA-34a(8個(gè))，miRNA-210(1個(gè))，miRNA-141(4個(gè))，miRNA-200c(6個(gè))，共11個(gè)靶基因。其中TGFBR1、ITGB3、VHL、VEGFA、GSTM3和CYPlBl為兩個(gè)及以上miRNA的靶基因。
　　 結(jié)論：生物信息學(xué)分析表明，差異表達(dá)的miRNA可能通過其靶基因在腎癌發(fā)生發(fā)展過程中起重要作用。
　　 第三部分腎透明細(xì)胞癌mi

7、RNA-34a、Notch1和Hes1的表達(dá)及意義
　　 目的：通過檢測miPNA-34a、Notch1和Hes1在腎透明細(xì)胞癌患者癌組織和癌旁組織中的表達(dá)情況，并分析其與腫瘤分期、病理分級等臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系，探討其與腎癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)系及可能的臨床意義。
　　 方法：收集自2009年9月～2011年1月在南昌大學(xué)第一附屬醫(yī)院泌尿外科行腎癌切除術(shù)患者的組織塊(癌組織和其癌旁組織)保存于液氮中。取術(shù)后病理切片證明病理分

8、型為腎透明細(xì)胞癌的病理組織共計(jì)48例。運(yùn)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢測miRNA-34a、Notch1和Hes1在腎透明細(xì)胞癌癌組織及其癌旁組織的表達(dá)；并分析其與臨床病理特征的關(guān)系。數(shù)據(jù)采用2-△△CT法進(jìn)行分析，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用均數(shù)士標(biāo)準(zhǔn)差表示，采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件對實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行配對樣本t檢驗(yàn)和兩樣本t檢驗(yàn)，各指標(biāo)間關(guān)系采用Spearman等級相關(guān)分析，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果：48例腎癌標(biāo)本中，miRNA

9、-34a有33例高表達(dá)，8例低表達(dá)，7例無差別；Notch1有36例低表達(dá)，3例高表達(dá)，9例無差別；Hes1有31例低表達(dá)，9例高表達(dá)，8例無差別。與癌旁組織相比，miRNA-34a、Notch1、Hes1總的表達(dá)變化倍數(shù)分別為：4.093±3.661；0.497±0.724；0.498±0.872。結(jié)果均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。miRNA-34a隨著腎癌病理分級的增高而增高，Notch1的表達(dá)則隨著腎癌病理分級的增高而降低(P<

10、0.05)。miRNA-34a和Notch1的表達(dá)水平還與年齡有關(guān)，年齡<50歲的患者miRNA-34a的表達(dá)更高、Notchl的表達(dá)更低(P<0.05)。兩者的表達(dá)水平在不同的性別、腫瘤大小和臨床分期的病例中無顯著差異。Hesl的表達(dá)與腎癌臨床病理參數(shù)間的關(guān)系差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　 結(jié)論：在腎透明細(xì)胞癌中，miRNA-34a、Notch1和Hes1的表達(dá)有差異。miRNA-34a及其調(diào)控的Notch1信號通路