肝癌NK細(xì)胞免疫抑制機(jī)制的研究.pdf

1、[目的]：建立人肝癌裸鼠皮下-肝原位移植瘤模型及NK細(xì)胞分離方法；檢測NK細(xì)胞的細(xì)胞毒活性及其活化性受體NKG2D的表達(dá)；觀察肝臟和脾臟組織病理變化。 [方法]：①建立人肝癌裸鼠皮下-肝原位移植瘤模型先用人肝癌細(xì)胞株Hep3B接種于裸鼠皮下，形成皮下移植瘤，然后用此移植瘤組織再接種于裸鼠肝內(nèi)，建立肝原位移植瘤模型(間接肝原位移植瘤模型)；②檢測裸鼠原發(fā)性肝癌對(duì)NK細(xì)胞免疫活性的影響分別用Ficoll-Hypaque分層液、酶消化

2、法和機(jī)械法初步制備裸鼠外周血、肝臟及脾臟混合淋巴細(xì)胞懸液后，用Percoll不連續(xù)密度梯度分離法分離NK細(xì)胞；用LDH方法檢測NK細(xì)胞的細(xì)胞毒活性；用流式細(xì)胞技術(shù)檢測不同組織NK細(xì)胞NKG2D表達(dá)百分率；用H-E染色觀察肝臟移植瘤對(duì)肝臟和脾臟淋巴細(xì)胞的影響。 [結(jié)果]：①建立的間接肝原位移植瘤模型能穩(wěn)定傳代，移植瘤存活率達(dá)100％；②Percoll不連續(xù)密度梯度分離法分離的NK細(xì)胞純度可達(dá)到68.5％；③外周血、肝臟及脾臟的NK

3、細(xì)胞毒活性及NKG2D受體表達(dá)隨著腫瘤生長逐漸下降，其中肝臟NK細(xì)胞毒活性及NKG2D表達(dá)下降明顯；④荷瘤裸鼠肝臟癌組織與皮下瘤相同，癌組織異型性與時(shí)間呈正相關(guān)，脾臟淋巴小結(jié)在第4周增生明顯，第8周小梁結(jié)構(gòu)增多。 [結(jié)論]：①人肝癌裸鼠皮下-肝原位移植瘤模型具有高存活率的優(yōu)點(diǎn)，它的建立為人類肝癌的研究提供了理想的工具；②成功建立了裸鼠NK細(xì)胞分離方法；③原發(fā)性肝癌通過下調(diào)NKG2D的表達(dá)，對(duì)NK細(xì)胞有免疫抑制作用，這種作用主要發(fā)