有機(jī)磷農(nóng)藥殘留酶聯(lián)免疫直接競(jìng)爭(zhēng)檢測(cè)技術(shù)的研究.pdf

1、農(nóng)藥殘留是危害食品安全的重要因素之一，其中有機(jī)磷農(nóng)藥是目前使用最為廣泛的一類(lèi)農(nóng)藥，約占農(nóng)藥總使用量的70％，因此對(duì)有機(jī)磷農(nóng)藥的檢測(cè)是食品安全檢測(cè)的重要內(nèi)容。目前用來(lái)檢測(cè)有機(jī)磷農(nóng)藥的方法主要是氣相色譜(GC)和高效液相色譜(HPLC)，這些方法前處理步驟復(fù)雜，費(fèi)時(shí)費(fèi)力，設(shè)備昂貴，需要專(zhuān)業(yè)人員操作，適宜實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)，不適宜大量樣品現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)。 酶聯(lián)免疫吸附分析(Enzyme-linked immunosorbent assay，EL

2、ISA)方法快速、靈敏、選擇性好，具有檢測(cè)成本低，操作簡(jiǎn)便，安全可靠等優(yōu)點(diǎn)，同時(shí)還適宜痕量物質(zhì)的檢測(cè)。近年來(lái)，有關(guān)農(nóng)藥的免疫檢測(cè)方法已有一些報(bào)道，但多數(shù)為間接酶聯(lián)免疫法。因此本實(shí)驗(yàn)研究直接競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫分析方法檢測(cè)有機(jī)磷農(nóng)藥的技術(shù)，旨在用一步抗原抗體反應(yīng)，快速的檢測(cè)半抗原，方法簡(jiǎn)便，靈敏度高。 本論文選取國(guó)家明令禁止使用的甲胺磷、甲基對(duì)硫磷、對(duì)硫磷三種高毒、高殘留的有機(jī)磷殺蟲(chóng)劑為研究對(duì)象。根據(jù)其結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，首先合成了農(nóng)藥的半抗原，然

3、后將半抗原與載體蛋白牛血清蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)偶聯(lián)合成免疫原和酶標(biāo)抗原。 用合成的免疫原免疫兔子后獲得多克隆抗體，用間接ELISA測(cè)定三種抗體的效價(jià)分別為1：4000、1：4500、1：6000。并且與其他主要的有機(jī)磷農(nóng)藥進(jìn)行交叉反應(yīng)試驗(yàn)，試驗(yàn)表明交叉反應(yīng)率都很低。通過(guò)直接競(jìng)爭(zhēng)ELISA檢測(cè)，確定甲胺磷、對(duì)硫磷、甲基對(duì)硫磷包被原(即抗體)和酶標(biāo)抗原的最佳工作濃度分別為1：2000、0.001mg/mL，1：3000