比較不同人脂肪源性間充質(zhì)干細(xì)胞生物學(xué)特性差異的研究.pdf

1、背景：干細(xì)胞治療急性心肌梗死是近年來(lái)研究的熱點(diǎn)。脂肪源性間充質(zhì)干細(xì)胞(adiposetissue-derivedmesenchymalstemcells，ADMSCs)作為一種新的細(xì)胞工程的種子細(xì)胞因?yàn)槿〔姆奖?、?lái)源充足、更易被人們所接受等優(yōu)點(diǎn)逐漸被大家接受。國(guó)內(nèi)、外對(duì)于ADMSCs的研究還外于起步階段，其治療機(jī)制的基礎(chǔ)研究還很有限，在臨床應(yīng)用前尚有許多問(wèn)題有待解決。目前干細(xì)胞移植治療心梗的可能機(jī)制主要有兩種：1、MSCs可分化為心肌細(xì)

2、胞。2、通過(guò)旁分泌生長(zhǎng)因子(如HGF、VEGF)等來(lái)發(fā)揮作用。最近科學(xué)家們發(fā)現(xiàn)干細(xì)胞的分化能力存在性別差異，從雌性小鼠肌肉中提取的干細(xì)胞比雄性肌肉中提取的更易分化為身體組織。那么人干細(xì)胞是否也存在分化的性別差異呢?性別或其它個(gè)體因素(如年齡、是否有高血壓、糖尿病、冠心病等)對(duì)于干細(xì)胞增殖、分化、旁分泌、抗凋亡能力等生物學(xué)特性是否有影響呢?這些問(wèn)題的解決對(duì)于了解ADMSCs本身的生物學(xué)特性，指導(dǎo)ADMSCs基礎(chǔ)研究和臨床應(yīng)用具有十分重要的

3、意義。 目的：一是要建立從人腹部皮下脂肪組織中分離、培養(yǎng)ADMSCs方法，并從表面標(biāo)志物及多向分化潛能方面對(duì)其進(jìn)行鑒定，為后續(xù)研究做準(zhǔn)備。二是觀察比較不同人ADMSCs增殖、分化、旁分泌、抗凋亡能力的差別，從細(xì)胞水平探索ADMSCs是否存在個(gè)體差異，為今后干細(xì)胞的基礎(chǔ)研究及臨床應(yīng)用提供一種新的視角。 內(nèi)容和方法：根據(jù)以上目的，本研究分成為兩個(gè)部分： 第一部分研究人ADMSCs的分離及體外培養(yǎng)；并通過(guò)對(duì)獲取的細(xì)胞進(jìn)

4、行CD13、CD44、CD45、HLA-DR和VWF免疫組化細(xì)胞表面間充質(zhì)干細(xì)胞相關(guān)標(biāo)志的鑒定及成脂、成骨、成心肌多向分化潛能的檢驗(yàn)來(lái)驗(yàn)證其是否為間充質(zhì)干細(xì)胞。 第二部分對(duì)第一部分獲取的人ADMSCs分別采用MTT比色實(shí)驗(yàn)、ELISA雙抗體夾心法、流式細(xì)胞計(jì)數(shù)技術(shù)來(lái)比較不同人ADMSCs在增殖、旁分泌、分化及抗凋亡能力方面的差別。 結(jié)果： 從人腹部皮下脂肪組織分離培養(yǎng)出長(zhǎng)梭形細(xì)胞。這些細(xì)胞的細(xì)胞表面分子CD13、

5、CD44皆陽(yáng)性，CD45，HLA-DR、VWF均陰性；具有成脂、成骨、成心肌的多向分化能力。 MTT比色實(shí)驗(yàn)示：人ADMSCs由OD值描繪的生長(zhǎng)曲線大致形狀相似，呈S型。在第5d、7d、9d女性h-ADMSCs的OD值明顯高于相應(yīng)的男性h-ADMSCs(P＜0.01)，同時(shí)年輕個(gè)體ADMSCs的OD值更高。經(jīng)10umol/L5-aza誘導(dǎo)24小時(shí)后，流式細(xì)胞技術(shù)示女性h-ADMSCs的TNT的表達(dá)率普遍高于男性h-ADMSCs(

6、27.3％±2.4％VS18.9％±2.5％，P＜0.01)，而且年輕個(gè)體的ADMSCs更容易被誘導(dǎo)并表達(dá)TNT。Elisa結(jié)果示：女性h-ADMSCs分泌VEGF和HGF的能力要強(qiáng)于男性h-ADMSCs，前者為1582±132pg/106個(gè)細(xì)胞VS1265±133pg/106個(gè)細(xì)胞P＜0.01，后者為13316±1404pg/106個(gè)細(xì)胞VS11790±1541pg/106個(gè)細(xì)胞P＜0.01。用含500umol/LH2O2的培養(yǎng)基誘導(dǎo)

7、30分鐘后，流式細(xì)胞技術(shù)示女性h-ADMSCs的凋亡率低于男性h-ADMSCs(18.68％±1.35％VS25.21％±1.57％，P＜0.01)，同時(shí)年輕個(gè)體的AOMSCs更容易被誘導(dǎo)凋亡。 結(jié)論： 1．通過(guò)酶消化的方法成功地從人皮下脂肪組織分離培養(yǎng)出具有多向分化潛能的ADMSCs。 2．h-ADMSCs在增殖、分化、旁分泌、抗凋亡能力上存在性別差異。年齡也是影響h-ADMSCs增殖、分化和凋亡的一個(gè)重要因素