小麥硬度基因遺傳多樣性的SSR分子標(biāo)記研究.pdf

1、小麥的籽粒硬度與面粉顆粒度大小、出粉率、破損淀粉粒數(shù)量有關(guān),決定著小麥的加工品質(zhì),是小麥重要品質(zhì)性狀之一,同時(shí)也是國(guó)內(nèi)外小麥?zhǔn)袌?chǎng)分級(jí)和定價(jià)的重要依據(jù)。本研究在影響硬度性狀的主效基因Pina和Pinb座位周圍尋找微衛(wèi)星重復(fù)位點(diǎn),設(shè)計(jì)引物,通過(guò)瓊脂糖電泳、聚丙烯酰胺電泳、毛細(xì)管電泳以及核苷酸測(cè)序的方法對(duì)青海育成品種、西藏地方小麥品種和節(jié)節(jié)麥進(jìn)行了遺傳多樣性研究,獲得以下結(jié)果:
　　1.通過(guò)分析小麥硬度基因周圍的187kb核苷酸序列,發(fā)

2、現(xiàn)了20個(gè)微衛(wèi)星位點(diǎn)。篩選4個(gè)重復(fù)度高的位點(diǎn)并設(shè)計(jì)引物,經(jīng)過(guò)瓊脂糖電泳分析后,發(fā)現(xiàn)了擴(kuò)展較好的微衛(wèi)星位點(diǎn)SSR7。測(cè)序后發(fā)現(xiàn)PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的核苷酸序列與目標(biāo)片段一致,包含18次 AG重復(fù)的SSR區(qū)域。該位點(diǎn)位于Pina基因的啟動(dòng)子區(qū)域,距起始密碼子495個(gè)堿基處,可以檢測(cè)硬度基因的等位變異。
　　2.SSR7位點(diǎn)在青海省育成小麥品種和西藏小麥品種中具有明顯的多態(tài)性,一共有18種類型。最短類型為154bp,最長(zhǎng)類型為182bp。片段

3、長(zhǎng)度在176bp以上全部為西藏品種,其中包含品種最多的類型為171bp,有22個(gè)品種。片段長(zhǎng)度為154bp和166bp類型中品種數(shù)各有一個(gè),品種名分別為y1904和香農(nóng)3。
　　3.從SSR7引物所擴(kuò)增的青海育成品種和西藏地方小麥品種中,挑選出毛細(xì)管電泳中條帶差異較顯著的品種,又用保護(hù)SSR7微衛(wèi)星區(qū)域的引物Pina-promoter擴(kuò)增上述挑選的差異品種和節(jié)節(jié)麥材料,將其測(cè)序后發(fā)現(xiàn):青海育成小麥和西藏地方小麥與節(jié)節(jié)麥的堿基排序中

4、重復(fù)序列均為AG,重復(fù)類型共有6種,重復(fù)次數(shù)分別為6,10,16,18,19,20,而節(jié)節(jié)麥中僅存在兩種重復(fù)類型,次數(shù)分別為6和10。從三個(gè)不同品種的重復(fù)序列的差異性可推測(cè),普通小麥Pina和Pinb基因很可能不是來(lái)源于本實(shí)驗(yàn)研究的節(jié)節(jié)麥材料。
　　4.青海育成品種和西藏地方小麥品種堿基序列的SSR5’端,比節(jié)節(jié)麥多1-2個(gè) AC重復(fù)。除節(jié)節(jié)麥品種AS61和AS81之外,其余的22個(gè)節(jié)節(jié)麥中起始密碼子上游660bp存在一個(gè)13個(gè)堿

5、基的缺失。節(jié)節(jié)麥與普通小麥在SSR7位點(diǎn)以及Pina基因啟動(dòng)子區(qū)域存在的核苷酸序列差異,可以為鑒定普通小麥和節(jié)節(jié)麥中硬度基因的來(lái)源提供依據(jù)。
　　5.相同引物SSR7的毛細(xì)管電泳片段長(zhǎng)度對(duì)應(yīng)著不同的籽粒硬度值以及硬度基因的等位變異類型。這可能是由于SSR位點(diǎn)發(fā)生改變的頻率遠(yuǎn)高于SNP位點(diǎn)發(fā)生的概率,也有可能是SSR位點(diǎn)以外的擴(kuò)增區(qū)域發(fā)生的變異,還需要進(jìn)一步的研究與驗(yàn)證。
　　以上這些研究結(jié)果為小麥硬度基因的等位變異檢測(cè)以及分