雙靶向溶瘤腺病毒SG500-IL24治療結(jié)腸癌的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、癌癥作為惡性程度最高的疾病之一，已嚴(yán)重威脅到了人類的生命健康，但是到目前為止都還沒有很理想的治療方法。隨著分子生物學(xué)的發(fā)展和對(duì)腫瘤發(fā)病機(jī)制研究的深入了解，腫瘤的靶向治療越來越受到人們的重視。溶瘤病毒(OV)，又稱腫瘤細(xì)胞特異性增殖病毒，在腫瘤治療中極具前景，它具有選擇性地在腫瘤細(xì)胞中增殖、在腫瘤間自行擴(kuò)散的優(yōu)點(diǎn)，且同現(xiàn)有的治療手段無交叉耐藥作用。到目前為止，已有十余種不同類型的溶瘤病毒進(jìn)入到臨床試驗(yàn)中，包括溶瘤腺病毒也即選擇性增殖型腺病

2、毒(CRAD)、單純皰疹病毒(HSV)、痘苗病毒、呼吸道腸道過濾性病毒及新城疫病毒等。其中，溶瘤腺病毒表現(xiàn)出了很好的治療優(yōu)勢，進(jìn)一步的研究重點(diǎn)在于提高病毒的靶向性，降低毒性。而這主要是通過調(diào)控病毒的復(fù)制來實(shí)現(xiàn)的，通常利用腫瘤特異性啟動(dòng)子來調(diào)控腺病毒增殖所必需的基因，以此達(dá)到溶瘤腺病毒只在腫瘤細(xì)胞內(nèi)增殖的目的。 惡性腫瘤細(xì)胞的無限增殖能力主要是依靠端粒酶的激活來不斷地維持端粒的長度。端粒酶在正常體細(xì)胞中沒有活性或活性很低，但在多數(shù)

3、惡性腫瘤和腫瘤細(xì)胞株中均處于激活狀態(tài)，是目前所報(bào)道最為廣譜的腫瘤生物分子標(biāo)記。端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶(TERT)是維持端粒酶活性所必需的催化亞單位，它的表達(dá)調(diào)控在轉(zhuǎn)錄水平上。利用人端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶(hTERT)啟動(dòng)子來調(diào)控病毒復(fù)制增殖所必需的基因，理論上可使病毒選擇性在端粒酶陽性的腫瘤細(xì)胞中增殖。此外，多數(shù)實(shí)體腫瘤的瘤體內(nèi)為缺氧微環(huán)境。在腫瘤細(xì)胞的惡性增殖過程中，不斷增多的腫瘤細(xì)胞導(dǎo)致細(xì)胞耗氧量劇增，造成腫瘤內(nèi)缺氧微環(huán)境的形成。缺氧進(jìn)而誘導(dǎo)缺氧誘

4、導(dǎo)因子-1(HIF-1)在細(xì)胞核內(nèi)大量聚積，它與一系列缺氧反應(yīng)靶基因上的特定結(jié)合位點(diǎn)缺氧反應(yīng)元件(HRE)結(jié)合，在靶基因的轉(zhuǎn)錄起始部位形成一個(gè)轉(zhuǎn)錄起始復(fù)合物，從而啟動(dòng)靶基因的轉(zhuǎn)錄表達(dá)。隨著對(duì)其研究的不斷深入，以HRE為靶點(diǎn)成為腫瘤靶向治療中的又一熱點(diǎn)。 結(jié)腸癌是最為嚴(yán)重的惡性腫瘤之一，發(fā)病率和致死率都很高，并有逐年增長的趨勢。盡管傳統(tǒng)的手術(shù)治療，放療和化療得到長足發(fā)展，但對(duì)于中晚期癌癥患者仍束手無策。因此研制開發(fā)更為有效的癌癥治

5、療方案顯得非常必要。白細(xì)胞介素-24(IL-24)是最近發(fā)現(xiàn)的具有顯著廣譜抗腫瘤作用的細(xì)胞因子，可以通過多種途徑抑制腫瘤的生長，在已經(jīng)完成的多項(xiàng)腫瘤治療實(shí)驗(yàn)中都表現(xiàn)出了顯著的治療效果。同時(shí)這些腫瘤抑制作用不依賴于p53、Rb及p16等抑癌基因，從而對(duì)正常細(xì)胞并無影響，所以，IL-24在結(jié)腸癌的治療中有著良好的應(yīng)用前景。 為了有機(jī)結(jié)合溶瘤腺病毒和IL-24治療實(shí)體瘤的優(yōu)點(diǎn)，本研究將IL24基因插入到由人端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶啟動(dòng)子調(diào)控E1

6、a基因、人缺氧反應(yīng)元件啟動(dòng)子調(diào)控E1b基因的增殖型腺病毒基因組，成功構(gòu)建了攜帶IL-24基因的雙靶向溶瘤腺病毒載體SG500-IL24。體外實(shí)驗(yàn)表明重組病毒SG500-IL24可以通過誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡特異性地殺傷結(jié)腸癌細(xì)胞，而基本不會(huì)損傷正常細(xì)胞的活性，其腫瘤殺傷能力明顯優(yōu)于無攜帶基因的增殖腺病毒SG500及攜帶IL-24基因的非增殖腺病毒Ad-IL24。用SG500-IL24治療小鼠HCT-116結(jié)腸癌移植瘤模型觀察到明顯的抗腫瘤療效