Thapsigargin抑制體外培養(yǎng)的人晶狀體上皮細胞增殖及防治兔眼后發(fā)性白內(nèi)障的實驗研究.pdf

1、中山大學碩士學位論文Thapsigargin抑制體外培養(yǎng)的人晶狀體上皮細胞增殖及防治兔眼后發(fā)性白內(nèi)障的實驗研究姓名：姬紅培申請學位級別：碩士專業(yè)：眼科學指導教師：吳明星20060512T h a p s i g a r g i n 抑制體外培養(yǎng)的人品狀體上皮細胞增殖及防治兔眼后發(fā)性白內(nèi)障的實驗研究 中I l f 大學物。為進一步研究T G 抑制晶狀體上皮細胞增殖的機制，探討T G 應用于后發(fā)性白內(nèi)障防治的可能性，我們運用不同濃度的T G

2、 處理體外培養(yǎng)的人晶狀體上皮細胞系S R A O I ／0 4 ，研究T G 增殖抑制發(fā)生的分子機制；并將兩種不同濃度的T G 注入兔眼白內(nèi)障術后的晶體囊袋內(nèi)，觀察它對兔眼后發(fā)性內(nèi)障形成的影響。本研究工作主要包括以下兩部分：第一部分T h a p s i g a r g i n 對體外培養(yǎng)的人晶狀體上皮細胞系S R A 0 I ／0 4 增殖抑制作用及機制探討目的：研究t h a p s i g a r g i n ( T G ) 對體

3、外培養(yǎng)的晶狀體上皮細胞增殖的影響，并探討細胞增殖抑制的分子機制。方法：不同濃度的T G 處理S R A O I ／0 4 細胞7 2 小時，噻唑藍比色法( M T T ) 分析細胞增殖改變；透射電鏡觀察細胞超微結構變化：末端脫氧核糖核酸轉移酶介導的缺口末端標記法( T U N E L ) 檢測細胞核中脫氧核糖核酸( D N A ) 的斷裂情況；流式細胞儀( 碘化丙啶，P T 法) 檢測細胞周期中亞G 。期含量；并通過激光共焦顯微鏡利流式

4、細胞儀檢測C a s p a s e 3 活性亞單位( 1 7 ／1 9 K D ) 的表達及細胞陽性表達率。結果：M T T 法顯示T G 為0 ．3 2 5 ～5 u M 時，細胞增殖抑制率變化顯著，I c 。大約為0 ．8I J - M 。透射電鏡下見T G 處理S R A O I ／0 4 細胞膜皺縮，染色體濃縮、邊集、核膜裂解、凋亡小體形成。0 ，0 ．1 ，0 ．5 ，l ，1 0 u M T G 處理S R A O I ／

5、0 4 細胞7 2小時，流式細胞儀( P I 法) 及T U N E L 法檢測細胞凋亡率隨著T G 濃度的增加而增加，呈濃度依賴性。T G 激活C a s p a s e 3 ，細胞陽性表達率也呈濃度依賴性增加；T G 為1 0 u M 時，幾乎每一個細胞漿內(nèi)C a s p a s e 3 都被激活。結論：T h a p s i g a r g i n 激活C a s p a s e 3 ，通過c a s p a s e 家旗級聯(lián)反應