亞麻木酚素的提取及對(duì)糖尿病小鼠腎臟保護(hù)作用研究.pdf

1、木酚素(lignan)是存在于可食植物中的一種植物化學(xué)物質(zhì)，結(jié)構(gòu)上屬于多酚類化合物，木酚素的化學(xué)結(jié)構(gòu)與雌激素十分相似，能與雌激素受體相結(jié)合而表現(xiàn)為雌激素活性或抗雌激素活性。研究表明它除對(duì)內(nèi)源性激素的代謝起作用外，同時(shí)具有一定的抗氧化活性，可以預(yù)防某些腫瘤(如前列腺癌與乳腺癌)、心血管疾病及糖尿病的發(fā)生。亞麻木酚素是從亞麻籽中分離出來(lái)的植物木酚素，國(guó)外文獻(xiàn)報(bào)道亞麻木酚素可以預(yù)防1型、2型糖尿病。但國(guó)內(nèi)關(guān)于亞麻木酚素的生物活性及其對(duì)糖尿病的

2、防治作用尚未見報(bào)道。本課題在建立亞麻籽木酚素測(cè)定方法的前提下，對(duì)脫脂亞麻籽進(jìn)行木酚素類化合物的提取，并進(jìn)行了亞麻木酚素提取物對(duì)糖尿病小鼠腎臟保護(hù)作用的初步研究，以便為尋找天然植物藥物及開發(fā)保健品提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 第一部分HPLC法測(cè)定亞麻籽中亞麻木酚素的含量，為建立亞麻籽中亞麻木酚素(以開環(huán)異落葉松脂素計(jì))含量測(cè)定的高效液相色譜(HPLC)分離分析法。采用正交試驗(yàn)觀察甲醇濃度、鹽酸酸水解溫度、時(shí)間、濃度對(duì)提取開環(huán)異落葉松脂素的影響

3、。結(jié)果：最佳提取開環(huán)異落葉松脂素(SECO)的溶劑系統(tǒng)為質(zhì)量分?jǐn)?shù)為90％的甲醇，鹽酸酸水解溫度、時(shí)間、濃度分別為90℃、1h、3.5mol/L。HPLC法測(cè)定SECO的線性范圍在14.8～74μg/ml，相關(guān)系數(shù)為0.9998。亞麻籽中開環(huán)異落葉松脂素的含量為1.56mg/g，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為3.47％，低濃度加標(biāo)平均回收率為92.7％，高濃度加標(biāo)平均回收率為98.9％。結(jié)果提示此法簡(jiǎn)單快速，是測(cè)定亞麻籽中亞麻木酚素的有效方法。

4、第二部分亞麻木酚素提取工藝的研究通過(guò)對(duì)不同提取條件的優(yōu)化，確定從亞麻籽中提取木酚素的方法。分別采用乙醇加熱回流提取、乙醇超聲提取、甲醇加熱回流提取、甲醇超聲提取等不同方法提取亞麻籽中木酚素；通過(guò)C<,18>柱進(jìn)行純化，并對(duì)精制產(chǎn)品進(jìn)行分析鑒定。結(jié)果：乙醇超聲提取法優(yōu)于其它法；精制產(chǎn)品中SECO含量為20.1g/100g。結(jié)果提示乙醇超聲提取后采用C<,18>柱分離可有效獲得亞麻木酚素。 第三部分亞麻木酚素提取物對(duì)糖尿病小鼠腎臟的

5、保護(hù)作用，在對(duì)亞麻木酚素進(jìn)行提取的基礎(chǔ)上，觀察亞麻木酚素提取物對(duì)糖尿病小鼠早期腎損傷的影響并探討其作用機(jī)制。雄性ICR小鼠分六組：正常對(duì)照組；糖尿病模型對(duì)照組；糖尿病模型亞麻木酚素提取物[600mg/(kg·d)、1.2g/(kg·d)、3.6g/(kg·d)]治療組；糖尿病小鼠鹽酸二甲雙胍[100m g/(kg·d)]治療組。連續(xù)灌胃8周，實(shí)驗(yàn)?zāi)┍容^各組體重、腎重、腎重/體重、24 h尿白蛋白排泄率、腎組織M D A含量及腎組織S O

6、 D、G S H-P X活性。HE染色分析腎小球病理形態(tài)學(xué)改變。綜合評(píng)價(jià)亞麻木酚素提取物對(duì)腎臟的保護(hù)作用。結(jié)果：與糖尿病模型對(duì)照組比較，亞麻木酚素提取物中、高劑量組降低腎重、24 h尿白蛋白排泄率(P<0.05)，且提高腎臟組織SOD、GSH-Px活性，降低MDA含量。結(jié)果認(rèn)為亞麻木酚素提取物能減輕糖尿病小鼠腎臟損傷，對(duì)腎臟有積極的保護(hù)作用。其機(jī)制與其減輕腎臟氧化應(yīng)激有關(guān)。第四部分亞麻木酚素提取物急性毒性實(shí)驗(yàn)研究觀察亞麻木酚素提取物對(duì)小

7、鼠的急性毒性反應(yīng)，為擬定臨床安全劑量提供依據(jù)。采用急性毒性實(shí)驗(yàn)霍恩氏法，給ICR小鼠灌胃給藥，連續(xù)14d觀察小鼠行為活動(dòng)等指標(biāo)和毒性反應(yīng)程度，并在實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)處死小鼠進(jìn)行剖檢，以獲得初步毒性資料。結(jié)果：雌雄小鼠急性經(jīng)口LD<,50>值大于21.5g/kg BW；14d內(nèi)各組小鼠均健康存活，未見明顯中毒癥狀。提取物對(duì)小鼠的體重增長(zhǎng)和食物利用率無(wú)不良影響；臟器系數(shù)均無(wú)不良影響；肉眼觀察解剖的臟器，各標(biāo)本表面及切面未見異常改變，各臟器病理檢查無(wú)