小麥與條銹菌非親和互作的cDNA文庫構(gòu)建及表達序列標簽分析.pdf

1、小麥條銹病是一種重要的世界性的小麥葉部病害，培育抗病品種是控制小麥條銹病的經(jīng)濟有效的途徑。然而，大面積推廣種植單一抗病品種又常常促使條銹菌新小種的產(chǎn)生和發(fā)展，而最終導(dǎo)致小麥品種抗病性的“喪失”，目前這一狀況已成為抗病品種應(yīng)用中突出的問題。目前，小麥與條銹菌互作的研究主要集中在形態(tài)學、細胞學、組織學、遺傳學等方面，然而對于小麥與條銹菌互作的分子機理及事件仍不清楚。因此，開展對小麥與條銹菌互作關(guān)系的分子機理研究，揭示病原物和寄主互相的分子機

2、制，對于小麥抗條銹性的合理利用和小麥條銹病的可持續(xù)控制具有重要的理論和實際意義。 為了更全面地了解小麥與條銹菌非親和過程中所有基因的表達情況，全面揭示互作的分子機制，本研究以接種CY23生理小種后第16 h、24 h、36h和48h的水源11小麥葉片為建庫材料，提取各時間點的總RNA并等量混合，用SMART<'TM> cDNA Library Construction Kit首次構(gòu)建小麥條銹菌接種初期非親和互作的cDNA文庫。得

3、到原始文庫滴度1.2×10<'6> pfu/mL，擴增文庫滴度2×10<'9> pfu/mL，重組率97％，插入片段在0.4 kb到3 kb之間。 對文庫隨機挑取5200多個克隆進行單向測序，測序原始序列通過初步的如去載體序列、重復(fù)序列等處理后，共獲得1515條高質(zhì)量ESTs序列，CAP3聚類結(jié)果獲得494個Contigs和1021個獨立的ESTs。經(jīng)Blast比對分析，發(fā)現(xiàn)在所有的Unigenes中，未知功能蛋白和Blastx

4、比對后沒有顯著匹配的序列(nohits)共占46％，為最大類。功能已知的ESTs中，能量和代謝相關(guān)的基因為第一大類，約占32％，其中與光合作用相關(guān)的基因，如1，5-二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶(Rubisco)、葉綠體前體、葉綠素a/b結(jié)合蛋白，光合體系蛋白等在統(tǒng)計結(jié)果中出現(xiàn)的頻率最高；功能不確定或者不清楚地為第二類，約占22％；第三大類是編碼防衛(wèi)及抗病相關(guān)蛋白的基因，包括一些編碼誘導(dǎo)抗性蛋白、多種病程相關(guān)蛋白(PR蛋白)(包括多種蛋白酶