半夏組織培養(yǎng)體系和遺傳轉(zhuǎn)化體系的建立.pdf

1、半夏(Pinellia ternata(Thunb.)Breit)屬天南星科多年生宿根草本植物，主要產(chǎn)地是中國和日本。半夏在中藥材中的使用排名是第22位，作為一種傳統(tǒng)的中草藥，其加工的產(chǎn)品具有多種藥理作用，如燥濕化痰，和胃，主治痰濕水飲，嘔吐，咳喘等。
　　在自然生態(tài)條件下，野生半夏主要依賴塊莖、珠芽進行無性繁殖，繁殖率偏低。為滿足用藥需求，人類長期依賴采集半夏野生資源，但由于環(huán)境污染和耕作制度改革，導(dǎo)致了市場上半夏野生資源供不應(yīng)

2、求。為滿足市場需求，人工長期進行半夏的無性繁殖和高密度種植，不僅造成危害半夏的植物病毒、內(nèi)生菌和致病微生物的快速橫向擴散，而且造成病毒垂直傳播在植株中大量積累，嚴重影響產(chǎn)量及品質(zhì)。同時調(diào)查發(fā)現(xiàn)，田間雜草也同樣威脅著半夏產(chǎn)量。隨著生物技術(shù)的發(fā)展，使用植物組織培養(yǎng)技術(shù)可獲得大批量的半夏種苗，利用莖尖脫毒技術(shù)對半夏進行脫毒，能夠有效保障半夏品質(zhì)，利用基因工程技術(shù)得到抗草甘膦半夏新品種，可有效降低半夏的栽培管理成本。
　　本研究選用半夏葉

3、柄為研究材料，探索不同培養(yǎng)基配方對半夏無菌苗葉柄誘導(dǎo)脫分化、愈傷組織增殖及分化、生根的影響。結(jié)果表明:半夏葉柄誘導(dǎo)脫分化最佳培養(yǎng)基是MS+1.0mg/L2，4-D+0.2mg/L6-BA。愈傷組織增殖最適培養(yǎng)基是MS+1.0mg/L2，4-D+0.2mg/L6-BA。分化最適培養(yǎng)基是MS+1.0mg/L6-BA+0.2mg/L NAA。半夏生根最適培養(yǎng)基是1/2MS+0.2mg/L IBA+0.01mg/L6-BA。同時得到半夏一步成苗

4、的最佳培養(yǎng)基是MS+1.5mg/L6-BA+0.2mg/L NAA。
　　本研究運用莖尖脫毒技術(shù)，獲得半夏脫毒苗。用RT-PCR法檢測黃瓜花葉病毒CMV和大豆花葉病毒SMV的脫毒情況，檢測的5株脫毒苗中，有1株成功脫除黃瓜花葉病毒，有4株成功脫除大豆花葉病毒，僅有1株成功脫除兩種病毒。
　　本研究的半夏遺傳轉(zhuǎn)化采用農(nóng)桿菌葉盤法，外源基因載體為pM3301UbiSpCP4，轉(zhuǎn)化后的再生植株用PCR對株系進行目的基因檢測，50株