鵝源新城疫病毒自然弱毒株的分離、鑒定與免疫效果觀察.pdf

1、新城疫(ND)是由新城疫病毒(NDV)引起禽類的一種急性、烈性、高度接觸性傳染病，被國際獸疫局列為A類動物傳染病。到目前為止，世界范圍內(nèi)已發(fā)生過四次ND大流行，給各地養(yǎng)禽業(yè)發(fā)展造成了嚴重損失。作為NDV自然貯存庫的水禽，曾一度被認為對該病毒具有很強的抵抗力，感染后不表現(xiàn)任何臨床癥狀，即使感染強毒也不發(fā)病。但1997年以來，我國華東和華南地區(qū)先后發(fā)現(xiàn)了一種以侵害鵝的消化道和免疫器官為主要特征的傳染病，該病已在我國大部分地區(qū)呈流行趨勢，嚴重

2、影響了我國養(yǎng)鵝業(yè)的健康發(fā)展。目前已證實，該病的病原為新城疫病毒，其基因型以F基因Ⅶ型為主。 理論上講，NDV只有一個血清型，經(jīng)典ND疫苗(Ⅰ系、Ⅳ系等)的預防接種完全能夠抵抗病毒的感染。然而，用作種毒的特定疫苗毒株，經(jīng)過反復傳代或長期使用，可能會出現(xiàn)毒力增強或免疫原性減弱等問題，從而使疫苗的保護力減弱，增加了疾病防制的難度。免疫失敗導致的非典型ND的發(fā)生，對鵝致病的NDV強毒株的出現(xiàn)，不同基因型NDV的共同存在，這些問題的出現(xiàn)與

3、臨床上長期、大量地使用活疫苗所造成的免疫壓力有關(guān)。因此，篩選免疫原性較好的NDV弱毒株作為疫苗侯選株，從流行病學和免疫學的角度來說，均具有重要的現(xiàn)實意義。 筆者于江蘇省某健康鵝群篩選到一株NDV，通過雞胚接種和血清學試驗進行分離、鑒定，結(jié)果表明該毒株具有血凝活性，且該活性能被抗NDV標準陽性血清所抑制。應用電鏡技術(shù)、生物學特性檢測等方法對該毒株進行鑒定，電鏡下可見大量呈多形性的NDV病毒粒子，表面有囊膜。該毒株的MLD=10<'

4、-5>/0.1ml，MDT=148.8h，ICPI=0.375，參照新城疫的毒力判定標準，確定該分離株為NDV弱毒株，命名為G0405。 應用RT-PCR技術(shù)對G0405毒株的F基因進行擴增，擴增產(chǎn)物經(jīng)鑒定后進行克隆、測序，利用基因分析軟件對測定的F基因核苷酸序列及由其推導的氨基酸序列進行分析，并繪制遺傳發(fā)育進化樹。結(jié)果表明，G0405為F基因I型弱毒株，其F蛋白裂解位點的序列為<'112>G-K-Q-G-R-L<'117>，符

5、合NDV弱毒株的序列特征，與NDV經(jīng)典的毒力測定方法 (MDT、ICPI)判定結(jié)果相一致。將G0405與國內(nèi)外部分NDV強、弱毒株的F基因編碼區(qū)1 654bp核苷酸序列與其推導的F蛋白N-末端551個氨基酸序列的同源性進行比較，結(jié)果表明G0405與其它NDV毒株的F基因核苷酸序列的同源性在87.8％～96.1％之間，氨基酸序列的同源性在89.5％～98.4％之間。通過免疫原性測定、同群飼養(yǎng)擴散試驗、不同胚源擴增后對雛鵝的免疫對比試驗、與

6、Lasota和V4疫苗株的免疫效力比較試驗、攻毒保護試驗等，對G0405的免疫效果進行觀察研究。結(jié)果表明，G0405具有較好的免疫原性，能刺激鵝群產(chǎn)生較高的抗體水平。免疫后第5d開始產(chǎn)生抗體，并呈現(xiàn)上升趨勢，12d后抗體水平達到最高值(7.2Log2)。水平擴散能力較強，能夠產(chǎn)生整齊的抗體滴度，利于進行免疫監(jiān)測和免疫程序的制定。病毒在鵝胚與雞胚內(nèi)進行增殖后免疫鵝群，前者能夠產(chǎn)生相對較好的抗體水平。G0405免疫效果略高于V4，但低于La