補(bǔ)氣活血法對衰老大鼠ALI的作用機(jī)理研究.pdf

1、本研究旨在通過檢測衰老性急性肺損傷(ALI)大鼠模型血液及肺組織中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶SOD)、過氧化氫酶(CAT)、內(nèi)皮素(ET-1)、一氧化氮(NO)、乳酸脫氫酶(LDH)和髓過氧化物酶(MPO)等指標(biāo)的變化，研究衰老性ALI時的過氧化反應(yīng)特點，并以補(bǔ)氣活血中藥進(jìn)行干預(yù)，同時以誘生型一氧化氮合酶抑制劑氨基胍作為對照，研究氣虛血瘀與衰老性ALI發(fā)病的相關(guān)性，探討補(bǔ)氣活血法對衰老性ALI的作用機(jī)理，為臨床治療提供實驗依據(jù)。

2、 研究方法：將60只清潔級SD大鼠置于實驗環(huán)境中適應(yīng)性喂養(yǎng)1周，室溫22℃～24℃。隨機(jī)取出10只，作為正常對照組(normalgroup)，其余50只大鼠分別腹腔注射1％D-半乳糖溶液，劑量為50mg/kg體重，每日1次，連續(xù)6周，復(fù)制衰老大鼠模型。正常對照組大鼠每日注射等容量生理鹽水。 從第7周開始用藥干預(yù)，高劑量組用補(bǔ)氣活血中藥灌胃，劑量為12g生藥/kg(相當(dāng)于臨床成人用藥量的14倍);低劑量組用補(bǔ)氣活血中藥灌胃，

3、劑量為6g生藥/kg(相當(dāng)于臨床成人用藥量的7倍)，容量均為1ml/mg，每日1次。正常對照組、LPS組、AG組及衰老模型組均給予等容量蒸餾水。 連續(xù)20天。末次給藥1.5小時后，AG組一次性靜脈注射AG25mg/kg。再過30分鐘后，高、低劑量組、LPS組及AG+LPS組均靜脈注射LPS5mg/kg，造成大鼠ALI。正常組及衰老模型組靜脈注射等量生理鹽水。 各組在給LPS或生理鹽水2h后斷頭取血，立即分離血漿，并取血清

4、，-20℃凍存待檢。取右肺組織，制成10％的肺組織勻漿。4℃6000r/min離心5min，提取上清液，-20℃凍存待檢。取左側(cè)肺臟中部組織0.5cm×0.5cm，用10％甲醛溶液固定，常規(guī)石蠟包埋，切片，光學(xué)顯微鏡下觀察支氣管與肺組織的形態(tài)結(jié)構(gòu)。 研究結(jié)果： 1.一般狀態(tài)觀察造模各組大鼠注射D-半乳糖20天后開始出現(xiàn)咳嗽，蜷臥懶動，毛發(fā)逐漸失去光澤，進(jìn)食及飲水量減少，行動遲緩。正常對照組未見明顯異常反應(yīng)。注射LPS后，

5、大鼠呼吸頻率增快或呼吸困難，呼吸幅度加大，部分表現(xiàn)為呼吸窘迫，以LPS組最為明顯。高、低劑量及AG組以上癥狀較輕。 2.各組大鼠血液及肺組織中MDA、SOD、CAT、ET-1、NO、LDH和MPO的變化。 2.1各組大鼠血清及肺組織中MDA的含量結(jié)果顯示，衰老模型組大鼠血清及肺組織中MDA含量(3.37±0.32，1.04±0.13)較正常對照組(2.85±0.26，0.75±0.09)明顯升高(P＜0.01)；LPS組

6、MDA含量(3.70±0.28，1.24±0.17)較模型組明顯升高(P＜0.01或P＜0.05)。經(jīng)用藥干預(yù)，高劑量組(3.00±0.33，0.86±0.11)、低劑量組(3.34±0.30，1.01±0.12)、AG組(3.36±0.33，1.06±0.10)與LPS組相比均有明顯降低(P＜0.05或P＜0.01)；高劑量組與低劑量組、AG組相比明顯降低(P＜0.05或P＜0.01)；低劑量組與AG組相比無顯著性差異(P＞0.05)

7、。 2.2.各組大鼠血清及肺組織中SOD的含量結(jié)果顯示，衰老模型組大鼠血清及肺組織中SOD含量(308.77±26.05，4.96±0.46)較正常對照組(385.18±26.89，6.26±0.68)明顯降低(P＜0.01)；LPS組(302.00±25.70，5.00±0.41)與衰老模型組相比無明顯變化(P＞0.05)。經(jīng)用藥干預(yù)，高劑量組(359.41±29.42，5.65±0.61)、低劑量組(359.26±19.93

8、，5.53±0.37)血清及肺組織中SOD的含量與LPS組相比均有明顯升高(P＜0.05或P＜0.01)；AG組血清中SOD的含量(358.17±18.95)與LPS組相比明顯升高(P＜0.01)，AG組肺組織中SOD的含量(5.38±0.51)與LPS組相比無明顯差異(P＞0.05);高劑量組與低劑量組、AG組三者(三個治療組)之間相比均無顯著性差異(P＞0.05)。 2.3.各組大鼠血清及肺組織中CAT的含量結(jié)果顯示，衰老模

9、型組大鼠血清及肺組織中CAT含量(3.20±0.39，0.093±0.015)較正常對照組(4.22±0.44，0.156±0.026)明顯降低(P＜0.01)；LPS組血清及肺組織中CAT含量(3.38±0.43，0.095±0.022)與衰老模型組相比無明顯變化(P＞0.05)。經(jīng)用藥干預(yù)，高劑量組血清及肺組織中CAT的含量(3.99±0.42，0.148±0.015)與LPS組相比均有明顯升高(P＜0.01)；低劑量組(3.77±

10、0.40)、AG組(3.76±0.43)血清中CAT的含量與LPS組相比無顯著性差異(P＞0.05)；低劑量組(0.139±0.011)、AG組(0.128±0.017)肺組織中CAT的含量與LPS組相比均有明顯升高(P＜0.01)；三個治療組之間相比均無顯著性差異(P＞0.05)。 2.4.各組大鼠血漿及肺組織中ET-1的含量結(jié)果顯示，衰老模型組大鼠血漿及肺組織中ET-1含量(115.38±11.32，11.84±1.33)較

11、正常對照組(102.15±10.05，8.20±0.81)明顯升高(P＜0.01)；LPS組(155.60±13.72，13.35±1.08)較衰老模型組明顯升高(P＜0.01)。經(jīng)用藥干預(yù)，高劑量組(138.90±10.35，11.00±1.65)與LPS組相比均有明顯降低(P＜0.01);低劑量組(143.07±9.71)、AG組(144.82±7.84)血漿中ET-1的含量與LPS組相比均有明顯降低(P＜0.05)；但肺組織中ET

12、-1的含量(12.94±1.33，12.93±1.12)與LPS組相比無顯著性差異(P＞0.05)；三個治療組之間血漿中ET-1含量無顯著性差異(P＞0.05)，肺組織中ET-1含量高劑量組明顯優(yōu)于低劑量組和AG組(P＜0.01)。 2.5.各組大鼠血清及肺組織中NO的含量結(jié)果顯示，衰老模型組大鼠血清及肺組織中NO含量(36.48±3.24，0.296±0.034)較正常對照組(32.02±2.71，0.228±0.022)明顯

13、升高(P＜0.01)；LPS組(44.48±4.26，0.336±0.031)較衰老模型組明顯升高(P＜0.01)。經(jīng)用藥干預(yù)，高劑量組(41.66±3.51，0.311±0.023)、低劑量組(45.74±4.24，0.336±0.023)與LPS組相比均無明顯差異(P＞0.05)；AG組(39.76±3.08，0.291±0.042)較LPS組明顯降低(P＜0.01)；高劑量組血清中NO含量較低劑量組降低(P＜0.05)，肺組織中N

14、O含量高、低劑量組之間無明顯差異(P＞0.05)；高劑量組與AG組相比無顯著性差異(P＞0.05)。低劑量組與AG組相比有顯著性差異(P＜0.05)。AG組明顯優(yōu)于低劑量組。 2.6.各組大鼠血清及肺組織中LDH的含量結(jié)果顯示，衰老模型組大鼠血清及肺組織中LDH含量(225.60±13.42，225.42±15.44)較正常對照組(198.52±6.53，195.82±7.94)明顯升高(P＜0.01)；LPS組(244.34±

15、11.53，245.66±11.20)較衰老模型組明顯升高(P＜0.01)。經(jīng)用藥干預(yù)，高劑量組(207.28±13.22，198.84±12.31)與LPS組相比明顯降低(P＜0.01)；低劑量組(237.00±8.56)、AG組(238.7±6.75)血清中LDH含量與LPS組相比無明顯差異(P＞0.05)；低劑量組(223.73±13.51)、AG組(230.69±11.21)肺組織中LDH含量與LPS組相比明顯降低(P＜0.01

16、)；高劑量組與低劑量組、AG組相比均有明顯降低(P＜0.01)；低劑量組與AG組兩組之間無顯著性差異。 2.7.各組大鼠血清及肺組織中MPO的含量結(jié)果顯示，各組血清中MPO含量無明顯差異(P＞0.05)。衰老模型組大鼠肺組織中MPO含量(13.12±1.26)較正常對照組(11.55±1.05)明顯升高(P＜0.01);LPS組(15.08±0.81)較衰老模型組明顯升高(P＜0.01)。經(jīng)用藥干預(yù)，高劑量組肺組織中MPO含量(

17、12.12±0.91)與LPS組相比明顯降低(P＜0.01)；并且明顯低于低劑量組(14.33±0.77)和AG組(14.62±0.83)(P＜0.01)；低劑量組與AG組兩組之間無顯著性差異(P＞0.05)。 3.各組大鼠肺大體觀察及肺組織病理形態(tài)學(xué)觀察結(jié)果正常對照組及衰老模型組大鼠肺外觀無明顯異常改變。LPS致傷后，肺體積增大，重量增加，色澤暗紅，可見包膜下點片狀出血，切面疏松，有黃色或淡紅色液體溢出。 研究結(jié)論：

18、 1.衰老性ALI時，脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物MDA增高，SOD、CAT活性降低，表明機(jī)體氧化—抗氧化失衡是其發(fā)病的重要機(jī)制。 2.ALI時可見ET-1、NO、LDH、MPO水平升高，此可作為判斷組織損傷程度的重要依據(jù)。 3.補(bǔ)氣活血方藥能有效降低MDA含量，增加SOD、CAT活性，對抗氧化損傷以減輕脂質(zhì)過氧化物和自由基對機(jī)體的損傷。 4.補(bǔ)氣活血方藥能有效減少ET-1、NO的合成與釋放，降低LDH的含量，并能降低肺