胸椎黃韌帶骨化的血清比較蛋白質(zhì)組學(xué)研究.pdf

1、研究背景：
　　 黃韌帶骨化(ossification of ligament flava，OLF)與后縱韌帶骨化(ossification of posterior longitudianl ligament，OPLL)均為發(fā)生在脊柱韌帶的疾病，其病因未明、起病隱匿、病程漫長，主要以韌帶出現(xiàn)異位骨化、增厚并壓迫脊髓、神經(jīng)根，引起一系列脊髓損害及神經(jīng)根刺激癥狀，嚴(yán)重危害患者健康，是引起頸胸部椎管狹窄、脊髓受壓的常見原因。一般認(rèn)為

2、兩者是多因素疾病，其病理變化屬于異位骨化，是一種軟骨內(nèi)化骨的過程。目前關(guān)于OLF及OPLL的研究絕大多數(shù)都是針對該病的治療，涉及病因?qū)W方面的基礎(chǔ)研究較少，主要集中在基因?qū)W研究上，且研究多為OPLL，關(guān)于OLF的研究較少。
　　 2D-DIGE是近年來發(fā)展成熟的新蛋白質(zhì)組技術(shù)，是目前定量蛋白質(zhì)組學(xué)研究中可信度和準(zhǔn)確性最高的技術(shù)之一。目前尚無關(guān)于OLF的血清蛋白質(zhì)組學(xué)研究報(bào)道。對胸椎黃韌帶骨化(OLF)進(jìn)行比較蛋白質(zhì)組學(xué)研究，尋找患

3、者血清的蛋白質(zhì)差異，有助于從分子水平認(rèn)識OLF的發(fā)生發(fā)展機(jī)制，也可以為OLF的診斷和防治提供有效的分子標(biāo)志物。
　　 研究目的：
　　 1.構(gòu)建OLF患者與對照間血清差異蛋白質(zhì)組圖譜。
　　 2.應(yīng)用質(zhì)譜鑒定技術(shù)，對差異蛋白質(zhì)點(diǎn)進(jìn)行鑒定。
　　 3.結(jié)合蛋白功能網(wǎng)絡(luò)研究成果，分析所鑒定的蛋白質(zhì)在OLF發(fā)生發(fā)展中的作用。
　　 研究方法：
　　 1.采集5例胸椎黃韌帶骨化(OLF)患者和5例

4、年齡、性別匹配的腰椎間盤突出癥患者（不伴有脊柱OLF）的血清。經(jīng)去高豐度蛋白、CyDye染料交叉標(biāo)記，然后進(jìn)行熒光雙向差異凝膠電泳、圖像掃描，并用DeCyder v.5.02圖像分析軟件對DIGE圖像進(jìn)行分析和尋找差異點(diǎn)。
　　 2.對篩選出的差異點(diǎn)進(jìn)行基質(zhì)輔助激光解吸/電離飛行時(shí)間質(zhì)譜(MALDI-TOF-MS)分析，檢索IPI-HUMAN數(shù)據(jù)庫鑒定蛋白。
　　 研究結(jié)果：
　　 1.經(jīng)過熒光雙向差異凝膠電泳、

5、DeCyder軟件分析發(fā)現(xiàn)，胸椎黃韌帶骨化(OLF)患者和腰椎間盤突出癥患者（不伴有脊柱OLF）血清中有23個(gè)蛋白質(zhì)差異點(diǎn)，兩者之間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。其中6個(gè)點(diǎn)在OLF血清中表達(dá)上調(diào)，17個(gè)點(diǎn)表達(dá)下調(diào)。
　　 2.23個(gè)蛋白質(zhì)差異點(diǎn)經(jīng)質(zhì)譜分析，IPI-HUMAN數(shù)據(jù)庫鑒定出10個(gè)差異蛋白。
　　 結(jié)論：
　　 1.首次對胸椎OLF患者進(jìn)行蛋白質(zhì)組研究，成功構(gòu)建OLF患者與相匹配腰椎間盤突出癥患者（不伴有脊柱OL