人表皮光老化相關(guān)蛋白的比較蛋白質(zhì)組學(xué)研究.pdf

1、目的:本研究選擇人表皮組織為研究對(duì)象。1.建立適合人表皮組織的雙向電泳技術(shù)、獲得質(zhì)量?jī)?yōu)良的人表皮蛋白質(zhì)組雙向電泳圖譜。2.篩選并分析中年人表皮中與皮膚光老化相關(guān)的蛋白質(zhì)。
　　 方法:1.取人皮膚標(biāo)本20例(部位:包皮),將表皮用DispaseⅡ與真皮分離,提取人表皮組織總蛋白,以17cm固相pH梯度膠條(pH3～10)進(jìn)行雙向電泳,將硝酸銀染色后的雙向電泳凝膠予以掃描,使用PDQuest8.0圖像分析軟件對(duì)其進(jìn)行強(qiáng)度校正、點(diǎn)檢

2、測(cè)、定量、凝膠匹配、背景扣除、ID校正等,并對(duì)實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性進(jìn)行分析,對(duì)樣品制備、上樣量、等電聚焦參數(shù)及硝酸銀染色等關(guān)鍵步驟進(jìn)行改進(jìn)優(yōu)化。2.將取自中年人的皮膚標(biāo)本40例(年齡45～59歲),分為曝光組(20例；部位:面部、頭皮)及非曝光組(20例；部位:臀部、會(huì)陰部),使用方法1中建立的技術(shù)平臺(tái)分離兩組的表皮總蛋白,PDQuest8.0圖像分析軟件分析、對(duì)比兩組2-DE圖譜,檢測(cè)出組間差異表達(dá)的蛋白點(diǎn),并通過MALDI-TOF-MS及數(shù)

3、據(jù)庫檢索來鑒定差異候選蛋白。
　　 結(jié)果:1.獲得了分辨率高、重復(fù)性好且清晰的人表皮雙向電泳圖譜,分離出500余個(gè)蛋白點(diǎn)；本實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次,所得圖譜非常相似,膠問匹配率為85.5％。分離出蛋白點(diǎn)551±31個(gè),主要分布在分子量14～100KD、pH5～8之間；所得蛋白點(diǎn)數(shù)量適中、分辨率高,無條紋及背景干擾。2.曝光組2-DE凝膠圖譜上獲得蛋白點(diǎn)587±14個(gè),非曝光組534±15個(gè)。共檢測(cè)出組間差異表達(dá)的蛋白點(diǎn)32個(gè)-(1)非曝光

4、組,特異表達(dá):3個(gè)；高表達(dá):9個(gè)。(2)曝光組,特異表達(dá):6個(gè)；高表達(dá):14個(gè)。隨機(jī)選取3個(gè)在曝光組差異表達(dá)的蛋白質(zhì)點(diǎn)進(jìn)行鑒定,鑒定結(jié)果為:B2:P21活化激酶6(p21-activated kinase6,PAK6),B4:谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶P1-1(Glutathione transferase P1-1,GSTP1-1),B6:熱休克蛋白70(heat shock protein70,HSP70)。
　　 結(jié)論:通過對(duì)關(guān)鍵技術(shù)