結(jié)核分枝桿菌Rv0901基因在恥垢分枝桿菌的克隆表達(dá)及其功能研究.pdf

1、為研究Rv0901基因的功能及其與結(jié)核桿菌毒力、致病機(jī)制的關(guān)系,我們首先將該基因528bp片段首次從基因組中擴(kuò)增出,并在原核融合表達(dá)載體pGEX-1λT中成功表達(dá)了GST-Rv0901融合蛋白,為研究該基因功能奠定了基礎(chǔ).經(jīng)過生物信息學(xué)分析及實(shí)驗(yàn)證實(shí)Rv0901為結(jié)核分枝桿菌毒力株特有的基因序列,將Rv0901基因片段通過穿梭表達(dá)載體pMV261經(jīng)電轉(zhuǎn)化重組入不含該基因序列的無毒恥垢分枝桿菌(mc<'2>155),并在重組恥垢分枝桿菌(

2、Rmc<'2>155)中成功表達(dá)了19kDa的Rv0901編碼蛋白.將經(jīng)誘導(dǎo)表達(dá)的重組恥垢分枝桿菌和未重組的恥垢分枝桿菌同時感染小鼠骨髓巨噬細(xì)胞Ana-1,在不同的時間點(diǎn)計(jì)數(shù)存活的細(xì)胞數(shù)和細(xì)菌數(shù),發(fā)現(xiàn)兩菌株對細(xì)胞的活力均無明顯影響,巨噬細(xì)胞大量清除胞內(nèi)細(xì)菌,但重組株比未重組株在巨噬細(xì)胞中有一定存活優(yōu)勢,被細(xì)胞清除速率較慢.進(jìn)而我們將感染了重組恥垢分枝桿菌和未重組恥垢分枝桿菌的Ana-1細(xì)胞通過膜聯(lián)蛋白V(Annexin-V)和碘化丙啶(