甘草酸二銨對潰瘍性結(jié)腸炎大鼠作用的實驗研究.pdf

1、研究背景:潰瘍性結(jié)腸炎(ulcerative colitis，UC)是一種病因尚不十分清楚的主要累及直腸、結(jié)腸黏膜的慢性非特異性炎癥和潰瘍性病變，其發(fā)病率不論在國內(nèi)和國外都有逐年增高的趨勢。雖然近年來UC在環(huán)境、感染、遺傳、免疫等病因?qū)W方面以及藥物治療方面的研究取得了一定的進(jìn)展，并且一些新型藥物也已用于結(jié)腸炎的基礎(chǔ)研究和臨床治療，如新型5-ASA制劑、免疫反應(yīng)調(diào)控劑(抗CD3抗體visilizumab)及細(xì)胞因子調(diào)控劑(抗TNF—α的單

2、克隆抗體infliximab)等，但由于不良反應(yīng)發(fā)生率比較高、價格昂貴等問題影響了這些藥物在臨床上的廣泛應(yīng)用，因此，尋找一種療效確切、安全、價格便宜的藥物用于治療UC具有十分重要的臨床意義。 甘草酸二銨(Diammonium Glycyrrhizinate，DG)是甘草有效成分的第三代提取物，具有保護(hù)膜結(jié)構(gòu)、抗生物氧化、調(diào)節(jié)免疫及影響內(nèi)源性類固醇激素等生物活性。由于DG具有較強(qiáng)的與皮質(zhì)類固醇類似的非特異性抗炎作用，因此可能成為

3、替代皮質(zhì)激素治療UC的一種有效藥物，尤其是對那些對激素抵抗、依賴和有激素應(yīng)用禁忌癥的患者。到目前為止，國內(nèi)外對DG用于治療肝炎的研究報道較多，而有關(guān)其治療UC的報道卻很少，且機(jī)制不明。本課題主要研究DG治療UC模型大鼠的療效并探討相關(guān)的作用機(jī)制，進(jìn)而為臨床應(yīng)用其治療UC提供一定的理論依據(jù)。 目的:觀察甘草酸二銨對潰瘍性結(jié)腸炎大鼠的治療作用并探討其可能的作用機(jī)制。 方法:采用2,4—二硝基氯苯和乙酸聯(lián)合建模法制備UC模型

4、，模型形成后將存活大鼠隨機(jī)分為模型對照組和4個治療組，另設(shè)正常對照組，每組10只。各治療組給藥方法：5-ASA組給予5-ASA溶液(100mg/kg)灌腸；DG組給予DG溶液(40mg/kg)灌腸；5-ASA+DG組給予5-ASA溶液(100mg/kg)(上午8時)和DG溶液(40mg/kg)(下午4時)灌腸；5-ASA+地塞米松組給予5-ASA溶液(100 mg/kg)(上午8時)和地塞米松溶液(0.2mg/kg)(下午4時)灌腸，每

5、日1次，共7日。每日觀察各組大鼠大便性狀、便血及體重改變情況，評價疾病活動指數(shù)(DAI)。治療7天后，各組大鼠腹主動脈采血，分離血清，-20℃貯存，采用放射免疫法檢測血清白細(xì)胞介素-4(IL-4)、白細(xì)胞介素-6(IL-6)水平。取距肛門約8cm處結(jié)腸組織，一部分經(jīng)10％甲醛溶液固定，進(jìn)行HE染色；另一部分制作腸組織勻漿，采用化學(xué)比色法檢測髓過氧化物酶(MPO)、超氧化物歧化酶(SOD)活性。此外，采用免疫組織化學(xué)法分析結(jié)腸黏膜核因子—

6、κB(NF—κB)、誘生型一氧化氮合酶(iNOS)的表達(dá)。 結(jié)果:1．與正常對照組比較，模型對照組DAI、組織學(xué)評分及MPO活性顯著增高(P＜0.05)，血清IL-4、結(jié)腸黏膜SOD活性顯著降低(P＜0.05)，血清IL-6、結(jié)腸黏膜NF—κB p65、iNOS的表達(dá)顯著增加(P＜0.05)。2．治療7天后，與模型對照組相比，5-ASA組和DG組的DAI、組織學(xué)評分及MPO活性顯著降低(P＜0.05)，血清IL-4、結(jié)腸黏膜S

7、OD活性顯著增加(P＜0.05)，血清IL-6、結(jié)腸黏膜NF—κB p65、iNOS的表達(dá)顯著降低(P＜0.05)，但與正常對照組相比各指標(biāo)差異有統(tǒng)計學(xué)意義。3．與5-ASA組和/或DG組相比，5-ASA+DG組和5-ASA+地塞米松組的DAI、組織學(xué)損傷評分及MPO活性均顯著降低(P＜0.05)，血清IL-4、結(jié)腸黏膜SOD活性均顯著增加(P＜0.05)，血清IL-6、結(jié)腸黏膜NF—κB p65、iNOS的表達(dá)均顯著降低(P＜0.05

8、)，且與正常對照組相比各指標(biāo)差異無統(tǒng)計學(xué)意義。4．DG組與5-ASA組相比，上述各指標(biāo)差異無統(tǒng)計學(xué)意義；5-ASA+DG組與5-ASA+地塞米松組相比，上述各指標(biāo)差異無統(tǒng)計學(xué)意義。 結(jié)論: DG以及5-ASA均可以作為治療大鼠UC的藥物，其機(jī)制可能是通過調(diào)節(jié)NF—κBp65、iNOS在結(jié)腸黏膜的表達(dá)，增加IL-4釋放及結(jié)腸黏膜SOD活性，抑制IL-6產(chǎn)生，而達(dá)到治療結(jié)腸炎的目的，兩者療效相當(dāng)，聯(lián)合應(yīng)用時效果更佳，且具有與地塞米