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1、目的:分析WT1(Wilms’tumor1)基因的單核苷酸多態(tài)性(SNP)在急性髓系白血病患者和健康成年人的分布特點(diǎn),同時(shí)探討WT1SNPrs16754不同基因型對(duì)急性髓系白血病患者的臨床特征的影響,從而指導(dǎo)急性髓系白血病患者的治療及預(yù)后的評(píng)估。
方法:采用病例-對(duì)照研究方法,收集2007-2010年在華中科技大學(xué)附屬同濟(jì)醫(yī)院血液內(nèi)科確診急性髓系白血病的患者195例,作為實(shí)驗(yàn)病例組。無任何疾病的健康成年人99例作為健康對(duì)照組。
2、收集骨髓或外周血標(biāo)本,提取基因組DNA。設(shè)計(jì)針對(duì)WT1基因rs16754的PCR引物,經(jīng)聚合酶鏈反應(yīng)擴(kuò)增,將擴(kuò)增產(chǎn)物直接測(cè)序,同時(shí)用基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時(shí)間質(zhì)譜(MALDI-TOFMS)技術(shù)對(duì)SNP位點(diǎn)進(jìn)行重復(fù)檢測(cè)。對(duì)AML患者與正常人群WT1基因多態(tài)性進(jìn)行分析,計(jì)算基因型及等位基因頻率,病例組與對(duì)照組之間等位基因頻率比較采用卡方檢驗(yàn),計(jì)數(shù)資料比較采用卡方檢驗(yàn),計(jì)量資料比較采用T檢驗(yàn),所有結(jié)果用SPSS17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,P
3、<0.05認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
結(jié)果:1.共收集急性髓系白血病患者195例,WT1基因SNPrs16754位點(diǎn)的基因型以GG為主,共95例,AG基因型有85例,AA基因型有15例,分別占AML的48.7%、43.6%、7.7%。而健康人群共收集99例,其中基因型GG有55例,AG基因型有34例,AA基因型有10例,分別占為55.6%、34.3%、10.1%。AML患者,等位基因G的頻率為70.5%,而健康對(duì)照組為72.7%,兩組
4、之間的基因頻率分布比較無差異,X2=0.119,P=0.73。
2.WT1rs16754的主要等位基因?yàn)镚,與荷蘭及德國(guó)等歐洲國(guó)家的報(bào)道不同,其主要等位基因?yàn)锳。
3.WT1rs16754不同的基因型在性別分布上存在差異,WT1GG在AML男性患者的頻率(68%vs52%)較高,WT1AG、WT1AA在女性患者(48%vs32%)中的頻率較高,兩組之間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。WT1rs16754不同的基因
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