PI3K-AKT信號(hào)通路在ARC保護(hù)細(xì)胞氧化損傷中的作用機(jī)制研究.pdf

1、PI3K/AKT信號(hào)通路的激活可保護(hù)細(xì)胞免受外來(lái)刺激以維持機(jī)體穩(wěn)態(tài)的構(gòu)建。ARC（apoptosis repressor with a caspase recruitment domain）是目前唯一一個(gè)已知的具有抗內(nèi)源性以及外源性凋亡的蛋白，機(jī)體受不利因素刺激時(shí)其表達(dá)量增高;ARC蛋白的活化為高度分化的心肌，骨骼肌等終末細(xì)胞以及腫瘤細(xì)胞提供保護(hù)。目前，ARC發(fā)揮其保護(hù)作用的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)理仍然不清楚;PI3K/AKT信號(hào)通路是否介導(dǎo)ARC

2、發(fā)揮其生物學(xué)效應(yīng)尚未有文獻(xiàn)報(bào)道，其相關(guān)作用機(jī)理有待進(jìn)一步研究。通過(guò)體外培養(yǎng)原代雞胚心肌細(xì)胞，Hela以及293T細(xì)胞系;選擇不同濃度H2O2作用于三種細(xì)胞以建立體外氧化損傷模型;運(yùn)用基因工程技術(shù)構(gòu)建真核表達(dá)質(zhì)粒P-IRES2-ARC-EGFP;轉(zhuǎn)染該質(zhì)粒于原代雞胚心肌細(xì)胞、Hela以及293T細(xì)胞;運(yùn)用CCK-8法以及PI染色法評(píng)估細(xì)胞活力以證實(shí)ARC的過(guò)表達(dá)是否保護(hù)細(xì)胞免受氧化損傷;Western blot檢測(cè)ARC、P-AKT以及P

3、53蛋白的表達(dá);Real-Time PCR半定量PI3K、AKT以及P53基因的相對(duì)表達(dá)量;以此鑒定細(xì)胞氧化損傷模型下PI3K/AKT信號(hào)通路的激活以及相關(guān)基因的作用關(guān)系。應(yīng)用PI3K阻斷劑LY294002抑制PI3K/AKT信號(hào)通路的激活證明在細(xì)胞氧化損傷模型下PI3K/AKT信號(hào)通路是否介導(dǎo)ARC保護(hù)細(xì)胞氧化損傷。結(jié)果顯示:原代雞胚心肌細(xì)胞、Hela細(xì)胞氧化損傷模型下PI3K以及AKT基因以及P-AKT蛋白呈現(xiàn)高表達(dá);但293T細(xì)胞

4、P-AKT蛋白表達(dá)量不變;證明在原代雞胚心肌細(xì)胞、Hela細(xì)胞氧化損傷模型下PI3K/AKT信號(hào)通路的激活;抑制該信號(hào)通路明顯降低原代雞胚心肌細(xì)胞、Hela細(xì)胞活力;Hela以及293T細(xì)胞過(guò)表達(dá)ARC為其提供保護(hù);但ARC的過(guò)表達(dá)未能保護(hù)原代雞胚心肌細(xì)胞氧化損傷;LY294002抑制PI3K/AKT信號(hào)通路的同時(shí)，ARC為Hela細(xì)胞提供保護(hù);在293T細(xì)胞氧化損傷模型下，P53蛋白以依賴(lài)于H2O2作用劑量以及時(shí)間的形式呈現(xiàn)高表達(dá)，A