姜黃素對肝星狀細(xì)胞增殖與凋亡的影響的初步研究.pdf

1、　　目的
　　1.改進(jìn)大鼠HSC的分離方法。
　　2.探討姜黃素對HSC增殖與凋亡的影響。
　　方法
　　二氯亞甲基二磷酸鹽處理SD大鼠后,原位膠原酶灌注結(jié)合密度梯度離心法分離大鼠HSC,計(jì)算細(xì)胞得率和細(xì)胞活力,采用熒光顯微鏡觀察HSC自發(fā)熒光、Desmin免疫組化染色進(jìn)行HSC的鑒定,內(nèi)源性過氧化物酶染色檢測枯否細(xì)胞。
　　肝星狀細(xì)胞株HSC-T6與姜黃素孵育后,MTT比色法檢測姜黃素對HSC增殖的影響,

2、流式細(xì)胞術(shù)分析姜黃素對HSC細(xì)胞周期的影響,流式細(xì)胞術(shù)、透射電鏡和瓊脂糖凝膠電泳檢測細(xì)胞凋亡。
　　結(jié)果
　　HSC的得率為2×107~3×107細(xì)胞/大鼠,活率在95%以上,在328nm激發(fā)光下自發(fā)藍(lán)綠色熒光,Desmin陽性細(xì)胞在90%以上,未檢測到內(nèi)源性過氧化物酶陽性細(xì)胞。
　　20~100μmol/L姜黃素可以抑制HSC增殖(p<0.05),半數(shù)致死量為89μmol/L。以20、40、60μmol/L姜黃素作用

3、24h后,細(xì)胞周期分析發(fā)現(xiàn)S期細(xì)胞減少,G2/M期細(xì)胞顯著增加(P<0.05)；流式細(xì)胞術(shù)檢測到明顯的亞G1峰,各組的凋亡指數(shù)(%)分別是15.3±1.88,26.7±2.79,37.6±4.38,與對照組(1.9±0.64)相比,差異有顯著性(P<0.01)；透射電鏡觀察到細(xì)胞皺縮、核染色質(zhì)濃縮沿核膜排列和凋亡小體形成等細(xì)胞凋亡特征性的改變；瓊脂糖凝膠電泳可以見到明顯的DNA梯狀帶形成。以40 μmol/L姜黃素作用12、24、36、