大鼠不同部位穴位的形態(tài)學(xué)觀察.pdf

1、本文采用傳統(tǒng)組織學(xué)方法以及免疫組織化學(xué)方法，對大鼠典型的穴位和非穴位不同層次的皮膚結(jié)構(gòu)進(jìn)行了研究，觀察了這些穴位和非穴位之間，不同穴位之間的血管、神經(jīng)、纖維以及感受器的分布及數(shù)量的差別，以及穴位和非穴位在針刺和非針刺時(shí)對Cx43表達(dá)的差異，從不同角度觀察穴位的形態(tài)學(xué)結(jié)構(gòu)。 方法 將20只雄性Wistar大鼠隨機(jī)分為兩組，一組為正常對照組，另一組為針刺組，每組十只。正常對照組大鼠不做任何處理，直接用空氣栓塞法處死，將腹腔內(nèi)

2、容物清除后，固定在10﹪福爾馬林溶液中，固定15天；對針刺組大鼠，選定特殊穴位，上肢為內(nèi)關(guān)穴、下肢為后三里即足三里穴、背部為大椎穴、腹部為關(guān)元穴、爪部為涌泉穴，以及除涌泉穴外其他穴位旁開1cm的非穴位處對以上部位施行手針針刺，每10分鐘行一次提插捻轉(zhuǎn)，頻率為1-2次/秒，留針30分鐘后，空氣栓塞處死，余步驟同正常對照組大鼠。將固定好的大鼠取出，對照組大鼠取穴位處及穴位旁開1cm處大小約0.5×0.5×0.5cm的組織塊，針刺組取穴位和非

3、穴位施行針刺處大小與對照組相等的組織塊，干冰快速冷凍，冰凍切片機(jī)切片，厚度為20μm。涌泉穴處于后肢爪底部，面積小，因此涌泉穴沒有取對應(yīng)的對照組皮膚。將做好的切片分別采用H.E染色法、Masson三色染色法、Bielschowsky改良法以及一抗為Cx43的免疫組織化學(xué)等四種染色方法來進(jìn)行染色。染色后，光學(xué)顯微鏡觀察，統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，實(shí)驗(yàn)結(jié)果皆以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(-x±s)表示，采用單因素方差分析(one-wayANOVA)，采用q檢驗(yàn)。

4、 結(jié)果 1.穴位與非穴位之間的差異性比較 大鼠皮膚結(jié)構(gòu)層次與組織胚胎學(xué)里描述的人的皮膚形態(tài)略有區(qū)別，由表皮、真皮和皮下組織構(gòu)成。大部分皮膚有毛密布，有皮脂腺，局部有汗腺。鏡下可見其表皮很薄，大致可分為基底層、棘細(xì)胞層，顆粒層和角質(zhì)層，成年大鼠沒有透明層。腹部皮膚的復(fù)合毛囊較多，約占40﹪，而背部相對較少，約占20﹪。 對大鼠不同部位穴位和非穴位處組織冰凍切片，用H.E染色法，Masson三色染色法以及Biels

5、chowsky改良法染色后，觀察組織血管及其分支、神經(jīng)分支以及膠原纖維的分布，并計(jì)數(shù)，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果顯示，與非穴位組相比，足三里穴在血管分支、神經(jīng)分支及膠原纖維的數(shù)目上顯著性多于非穴位組，關(guān)元穴的神經(jīng)分支較非穴位組有較顯著差異，在血管分支及膠原纖維方面與非穴位組差異并不顯著；內(nèi)關(guān)穴、大椎穴位和非穴位的對照中，三者均無顯著差異，涌泉穴因取材問題，無相應(yīng)對照組的數(shù)據(jù)。 2.不同部位穴位間的差異性 對大鼠不同部位穴位和非

6、穴位作組織冰凍切片，用H.E染色法，Masson三色染色法以及Bielschowsky改良法染色后，光鏡下觀察血管及其分支、神經(jīng)分支以及彈性纖維的分布，并計(jì)數(shù)，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。以大鼠足三里穴作為基本的對照穴位，其他各組穴位分別與足三里穴位組進(jìn)行比較。得出，內(nèi)關(guān)穴與足三里穴比較，在血管及分支方面，無顯著性差異；關(guān)元、大椎則顯著性減少，而涌泉顯著性增多；在神經(jīng)纖維及分支方面，內(nèi)關(guān)、關(guān)元、大椎較足三里數(shù)目顯著性減少；而涌泉?jiǎng)t顯著性增多；在膠原

7、纖維數(shù)量上，內(nèi)關(guān)、關(guān)元、大椎與足三里無明顯差異性，而涌泉穴則膠原纖維的表達(dá)豐富，較足三里有明顯差異。 另外在局部視野里，感受器數(shù)目比較少，有些感受器在一個(gè)視野內(nèi)不可見到，難以統(tǒng)計(jì)，因此僅做了肉眼的粗略估算和比較，得出不同穴位間感受器的類型和數(shù)目有一定區(qū)別，在皮膚的層次里，足三里和內(nèi)關(guān)以游離神經(jīng)末梢為主，偶見觸覺小體和麥?zhǔn)闲◇w，而在關(guān)元和大椎穴區(qū)則以毛囊感受器和游離神經(jīng)末梢為主，涌泉穴則以環(huán)層小體，觸覺小體和大量豐富的末梢神經(jīng)為多

8、見，偶見露菲尼小體，在這些穴位的皮膚層次中未觀察到克勞終球。 3.Cx43在穴位和非穴位間表達(dá)的差別以及同一穴位針刺組和非針刺組的異同 免疫組織化學(xué)的染色結(jié)果顯示，大鼠皮膚中Cx43主要表達(dá)在上皮細(xì)胞胞漿、胞膜上，包括皮膚表皮和部分毛囊等上皮角質(zhì)的形成細(xì)胞，且在表皮基底層、棘細(xì)胞層中表達(dá)較多、角質(zhì)層中表達(dá)較少。根據(jù)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)，①非針刺組與針刺組中，與非穴位處比較，穴位處對Cx43表達(dá)的面積明顯增多，兩者相比有非常顯著性差異

9、；②穴位組和非穴位組中，與非針刺組相比，針刺組中Cx43的表達(dá)普遍增加，其中穴位針刺組與穴位非針刺組相比，各穴位對Cx43的表達(dá)增加，兩者有顯著性差異；非穴位針刺組較非穴位非針刺組相比，各部位對Cx43的表達(dá)也增加，其中，大椎穴相應(yīng)對照區(qū)針刺與非針刺組為顯著性差異，而足三里、內(nèi)關(guān)、關(guān)元為非常顯著性差異。③與非穴位組比較，在足三里、關(guān)元上，針刺組較非針刺組表達(dá)Cx43增加量的幅度要高于相對應(yīng)的非穴位組，兩者有顯著性差異；在大椎穴，兩者相較