內(nèi)皮細胞條件培養(yǎng)液對肝癌細胞癌干細胞表型及肝癌干細胞遷移的影響.pdf

1、癌癥是威脅人類健康的最嚴重疾病之一。世界各國常見腫瘤的死亡率前3位依次是肺癌、胃癌和肝癌。肝癌不僅死亡率高，且近年來發(fā)病率也在不斷上升，對肝癌的治療和預防以及相關(guān)機理探索一直是腫瘤領域的研究熱點。目前治療肝癌的主要手段有外科手術(shù)切除、放射治療、抗癌化學藥物治療、肝移植等，但這些方法還不能解決其復發(fā)和轉(zhuǎn)移問題，肝癌的治療仍然是臨床科學家們面臨的挑戰(zhàn)。
　　近年研究表明，惡性腫瘤是來源于數(shù)量微小、具有自我更新和多分化潛能的癌干細胞（C

2、SCs）。CSCs被認為是維系腫瘤起始和生長以及形成不同分化程度癌細胞及預后不良的根源，在癌癥復發(fā)轉(zhuǎn)移中起決定作用。癌干細胞學說的提出為癌癥的治療帶來了新的曙光，CSCs靶向干預成為癌癥治療的全新策略。
　　內(nèi)皮細胞（ECs）是血管壁的重要組成成分，也是腫瘤微環(huán)境的重要組成成分。有研究發(fā)現(xiàn)內(nèi)皮細胞與腫瘤細胞之間的交互對話對于促進CSCs表型、增強腫瘤復發(fā)轉(zhuǎn)移可能起著重要調(diào)節(jié)作用。肝臟是富含血管的組織，在肝癌發(fā)生發(fā)展過程中，內(nèi)皮細胞

3、參與構(gòu)建的腫瘤微環(huán)境是否促進肝癌細胞CSCs表型？是否影響肝癌干細胞（LCSCs）的遷移行為？這些問題目前還不清楚。為此，本文主要考察了內(nèi)皮細胞微環(huán)境對肝癌細胞CSCs表型以及LCSCs遷移行為的影響。主要研究內(nèi)容和結(jié)果如下：
　?、賰?nèi)皮細胞條件培養(yǎng)液（EC-CM）對肝癌細胞CSCs表型的影響
　　分別培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細胞和人肝癌細胞MHCC97H，收集EC-CM與肝癌細胞共培養(yǎng)，檢測EC-CM對人肝癌細胞藥物敏感性、克隆形

4、成能力、成球能力、遷移能力、侵襲能力以及癌干細胞表面標志物CD133表達的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，EC-CM能顯著提高 MHCC97H細胞對抗癌藥物順鉑和五氟尿嘧啶的藥物抵抗能力，增強MHCC97H細胞的克隆形成能力和腫瘤球形成能力。Transwell實驗和流式細胞術(shù)證實EC-CM不僅增強MHCC97H細胞的遷移能力和侵襲基底膜的能力，而且上調(diào)LCSCs標志物CD133的表達。實驗結(jié)果表明，EC-CM能夠促進MHCC97H細胞的癌干細胞表型。<

5、br>　?、贚CSCs的分選和鑒定
　　采用體外腫瘤球培養(yǎng)法進行LCSCs的分選。將MHCC97H細胞進行無血清懸浮培養(yǎng)，每隔5-6天進行傳代。利用第三代球體細胞進行藥物敏感性、克隆形成能力的檢測以及肝癌干細胞標志物CD133，CD44，Oct3/4的檢測。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，通過體外腫瘤球分選法獲得的球體細胞與MHCC97H細胞相比具有顯著的癌干細胞特征。球體細胞對不同濃度的抗癌藥物順鉑和五氟尿嘧啶表現(xiàn)出更強的耐藥性。球體細胞與MHCC9

6、7H細胞相比具有更強的克隆形成能力。流式細胞儀檢測發(fā)現(xiàn)球體細胞與MHCC97H細胞相比癌干細胞標志物CD133，Oct3/4)的表達明顯升高。這些結(jié)果表明，通過體外腫瘤球分選法富集的球體細胞是不同于MHCC97H細胞的亞群，具有CSCs特征。
　?、跡C-CM對LCSCs遷移行為的影響。
　　采用Transwell考察了EC-CM作用下LCSCs遷移行為的變化。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，EC-CM能夠顯著促進LCSCs的遷移能力。進一步通過

7、免疫熒光染色觀察了EC-CM作用下LCSCs細胞骨架F-actin的變化，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，EC-CM可能通過降低LCSCs中F-actin的表達。原子力顯微鏡結(jié)果顯示EC-CM作用LCSCs后細胞的楊氏模量降低。結(jié)果提示EC-CM可能通過減少F-actin的表達來降低LCSCs硬度，從而提高LCSCs的運動、變形能力，促進LCSCs的遷移。
　　本文的研究結(jié)果表明，內(nèi)皮細胞微環(huán)境能夠促進MHCC97H細胞的癌干細胞表型，通過改變細胞骨架