RNAi介導PEG10基因沉默對肝癌HepG2細胞Wnt-β-catenin信號通路及增殖、凋亡的影響.pdf

1、[目的]
　　 應用RNAi技術靶向封閉人肝癌HepG2細胞的PEG10基因，觀察PEG10基因表達下調對Wnt/β-catenin信號通路的關鍵因子β-catenin和Wnt1基因表達水平的影響，及對肝癌HepG2細胞增殖和凋亡的影響，探討PEG10基因對Wnt/β-catenin信號通路的影響在人肝癌發(fā)病機制中的作用，為肝癌的基因治療提供新思路。
　　 [方法]
　　 應用脂質體轉染技術將靶向PEG10的短發(fā)

2、夾狀RNA(short hairpin RNA，shRNA)轉染HepG2細胞，利用半定量RT-PCR和免疫組化法分別檢測PEG10、β-catenin和Wnt1基因mRNA及蛋白表達水平；同時應用MTT比色試驗檢測細胞增殖及應用流式細胞儀檢測細胞凋亡。
　　 [結果]
　　 1.轉染PEG10特異的shRNA能明顯抑制HepG2細胞中PEG10基因mRNA及蛋白的表達，與未轉染對照組比較，其抑制率分別為65.6％、60

3、.5％。
　　 2.成功下調PEG10基因表達后，HepG2細胞中β-catenin和Wnt1 mRNA及蛋白的表達均隨之明顯下調，與未轉染對照組比較，其mRNA水平抑制率分別為52.5％、96.1％，其蛋白水平抑制率分別為89.1％、78.6％。
　　 3.轉染PEG10-shRNA(10nM)24小時后對HepG2細胞增殖和凋亡均無明顯影響(P>0.05)。
　　 [結論]
　　 1.PEG10基因對