四環(huán)素、沙丁胺醇、特布他林酶聯(lián)免疫吸附測定法的建立.pdf

1、隨著社會的進步，人們的生活水平提高了，對肉蛋等動物性食品的需求量也大大增加，因此現(xiàn)代的養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展非常迅速，但在發(fā)展的同時，有一個問題不得不引起人們的重視，那就是一些藥物的使用問題。一些經(jīng)營者在經(jīng)濟利益驅(qū)使下，在養(yǎng)殖業(yè)中大量使用四環(huán)素、沙丁胺醇、特布他林等藥物用于治療畜禽疾病或作為促生長劑。這些藥物的大量使用不可避免使其殘留于動物的肌肉、蛋、奶、臟器、組織中，進而通過食物鏈影響人體健康，因此食品安全問題已引起全世界的高度重視。 為

2、了保障消費者的生命安全，越來越多的國家已建立了一些藥物殘留的檢測方法。傳統(tǒng)的分析方法包括HPLC、LC．MS、GC-MS等儀器法。這些方法準確、穩(wěn)定、可靠，可以作為標準方法，但儀器設備昂貴，樣品前處理復雜，費時，費力，不易普及，因此必須建立快速、靈敏、有效的檢測方法。酶聯(lián)免疫檢測法(ELISA)克服了以上方法的缺點，是一種快速、靈敏、方便、易普及的檢測方法，有著廣闊的發(fā)展前景。因此，本論文旨在建立四環(huán)素、沙丁胺醇和特布他林的酶聯(lián)免疫檢測

3、法(ELISA)。 對于四環(huán)素的研究，以O-tolidine法、對氨基苯甲酸(ABA)法、CDI法合成了四環(huán)素的三種免疫原TC-Tolidine．BSA、TC-ABA-cBSA、TC-CDI-cBSA，用所制備的三種免疫原免疫新西蘭白兔獲得了抗四環(huán)素抗體。每一種抗體都用三種包被抗原TC-Tolidine-OVA、TC-ABA-OVA、TC-CDI-OVA進行正交試驗，據(jù)此得到最佳的抗體-包被抗原的組合為TC-CDI-cBSA免疫

4、得到的抗體和TC-ABA-OVA作為包被抗原。根據(jù)這個組合得到的四環(huán)素抗體的IC<,50>是3.92μg/mL，檢測限為0.011μg/mL，線性范圍為0.1-100μg/mL。該抗體對金霉素和土霉素的交叉反應率分別為112﹪和小于2﹪。四環(huán)素在牛奶中的添加回收率在74-116﹪之間，批內(nèi)變異系數(shù)低于15﹪，批問變異系數(shù)低于25﹪。 對沙丁胺醇，本研究用對氨基苯甲酸(ABA)法和CDI法合成了沙丁胺醇的兩種免疫原SAL-ABA-

5、cBSA、SAL-CDI-cBSA，用所制備的免疫原免疫新西蘭白兔獲得了兩種抗沙丁胺醇抗體。用SAL-CDI-cBSA所獲得的抗血清用異型包被抗原SAL-BDE-OVA檢測時，沙丁胺醇抗體的IC<,50>是9.86 ng/mL，檢測限(LOD)是0.8 ng/mL，線性范圍為2.6-50 ng/mL；用SAL-ABA-cBSA所獲得的抗血清用異型包被抗原CL-OVA檢測時，抗體表現(xiàn)了較好的特異性，沙丁胺醇抗體的IC<,50>為8.97

6、ng/mL，檢測限(LOD)是0.1 ng/mL，線性范圍為0.8-1000 ng/mL。該抗體對鹽酸克倫特羅(107﹪)和硫酸特布他林(10﹪)表現(xiàn)了很大的交叉反應率，但對鹽酸萊克多巴胺和腎上腺素幾乎無交叉，用該抗體進行沙丁胺醇在豬肝中的添加回收率實驗，測得回收率在70-99﹪之間，批內(nèi)變異系數(shù)13.3-3.5﹪，批間變異系數(shù)14.3-5.5﹪。對于特布他林，本論文以對氨基苯甲酸(ABA)法和BDE方法合成了特布他林的兩種免疫原TER

7、-ABA-cBSA和TER-BDE-cBSA，用所制備的兩種免疫原免疫新西蘭白兔獲得了兩種抗特布他林的抗體。用TER-ABA-cBSA所獲得的抗血清用異型包被抗原TER-BDE-OVA檢測時，抗體表現(xiàn)了較好的特異性，特布他林抗體的IC<,50>為21.4 ng/mL，檢測限(LOD)是1 ng/mL，線性范圍為4-200 ng/mL；用TER-BDE-cBSA所獲得的抗血清用異型包被抗原TER-ABA-OVA檢測時，抗體表現(xiàn)了較好的特異

8、性，特布他林抗體的IC<,50>為9.25 ng/mL，檢測限(LOD)是0.3 ng/mL，線性范圍為0.8-100 ng/mL，該抗體對鹽酸克倫特羅(93.9﹪)和沙丁胺醇(94.9﹪)表現(xiàn)了很大的交叉反應率，但對鹽酸萊克多巴胺和腎上腺素幾乎無交叉，用該抗體進行特布他林在豬尿中的添加回收率實驗，測得回收率在80-99﹪之間，批內(nèi)變異系數(shù)12.5-2.2﹪，批間變異系數(shù)12.2-5.2﹪。 通過本課題的研究，我們成功地制備了四