蘆薈遺傳轉(zhuǎn)化受體體系的建立及轉(zhuǎn)基因研究.pdf

1、蘆薈屬多年生百合科草本植物，原產(chǎn)于非洲的干旱地區(qū)，葉片厚實(shí)多肉，富含多種活性物質(zhì)?，F(xiàn)代研究證明蘆薈具有瀉下通便、清肝泄熱、消瘡殺蟲(chóng)、消炎、抗紫外線輻射、抗病毒、能提高人體免疫機(jī)能及滋養(yǎng)毛發(fā)等功效，已經(jīng)被廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥、食品、美容化妝產(chǎn)品的生產(chǎn)和研制。隨著蘆薈產(chǎn)業(yè)的發(fā)展，蘆薈的需求量逐漸擴(kuò)大，而傳統(tǒng)的蘆薈繁殖一般采用扦插和分株繁殖，這些方法受繁殖基數(shù)的限制，初期繁殖速度較慢，而且容易使病毒積累，影響植株生長(zhǎng)，甚至退化。蘆薈無(wú)性快速繁殖技術(shù)

2、是獲得大量蘆薈種苗的一種重要方法，早在1974年Groenewad E用普勒多利亞種子培養(yǎng)出蘆薈愈傷組織植株成功以來(lái)，國(guó)內(nèi)外有關(guān)蘆薈快繁的研究不斷深入，已經(jīng)建立起了相對(duì)成型的無(wú)性快繁體系。近年來(lái)，基于蘆薈的藥用、美容等功效，人們開(kāi)始把目光投入到蘆薈的遺傳轉(zhuǎn)化中，并取得了初步的進(jìn)展。 本文采用蘆薈的莖段作為外植體，利用堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子基因(bFGF)進(jìn)行轉(zhuǎn)化蘆薈，獲得具有祛疤作用的蘆薈新品種，為今后開(kāi)發(fā)以此轉(zhuǎn)基因蘆薈制成祛疤

3、化妝品奠定了良好的基礎(chǔ)，使蘆薈這一熱帶藥用植物資源能夠更好地服務(wù)于人類(lèi)。主要結(jié)果如下： 1.建立了蘆薈遺傳轉(zhuǎn)化受體體系，摸索出不同蘆薈品種不定芽的誘導(dǎo)、繼代以及生根的有效方法，為蘆薈的遺傳轉(zhuǎn)化打下了堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。外植體最佳滅菌條件為用70％的酒精消毒30s，再用0.1％的升汞滅菌8min；不同的蘆薈品種均可誘導(dǎo)出不定芽，誘導(dǎo)率的高低主要取決于基因型、培養(yǎng)基種類(lèi)、激素濃度等。對(duì)于不定芽的誘導(dǎo)而言，MS培養(yǎng)基誘導(dǎo)效果優(yōu)于1/2MS培養(yǎng)

4、基，B5和N<,6>培養(yǎng)基誘導(dǎo)效果較差。就激素而言，在不定芽的誘導(dǎo)和分化階段，激素配比為6-BA2mg/L+NAA0.15mg/L 時(shí)的誘導(dǎo)率較高。在蘆薈的繼代培養(yǎng)階段，MS+6-BA4.0mg/L+NAA0.1mg/L 為最佳的繼代培養(yǎng)基，MS+NAA2.0mg/L+活性炭0.3％為最佳的生根培養(yǎng)基。 2.農(nóng)桿菌介導(dǎo)的蘆薈遺傳轉(zhuǎn)化技術(shù)：利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將bFGF 基因?qū)肽玖⑻J薈中，研究農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化系統(tǒng)的條件，對(duì)不同類(lèi)型的菌株、

5、不同的菌液濃度、不同的侵染時(shí)間等條件進(jìn)行探討。通過(guò)對(duì)農(nóng)桿菌介導(dǎo)蘆薈遺傳轉(zhuǎn)化影響因素系統(tǒng)的研究，建立了優(yōu)化的蘆薈轉(zhuǎn)化體系。用繼代培養(yǎng)獲得的粗壯的蘆薈單株莖段作為轉(zhuǎn)化外植體，在MS培養(yǎng)基上預(yù)培養(yǎng)3～5d，以O(shè)D<,600>為0.6～0.8的EHA105農(nóng)桿菌工程菌液侵染25min，在MS+蔗糖10g/L+100μmo/L 乙酰丁香酮的共體培養(yǎng)基上培養(yǎng)3d，在MS+6-BA3mg/L+Cef400mg/L+Kan50mg/L的篩選培養(yǎng)基上培養(yǎng)