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1、磷脂酶D(PLD)能催化水解卵磷脂(PLs)釋放出磷脂酸和膽堿，在乙醇等物質(zhì)存在的條件下，PLD能進(jìn)行堿基交換反應(yīng)，將具有羥基的乙醇等物質(zhì)與膽堿的極性頭部進(jìn)行酯交換反應(yīng)，連接到磷脂受體上。因此，具有堿基交換功能的PLD通過對磷脂極性頭部特異性基團(tuán)的改變，可以生成許多稀有或半合成磷脂，滿足保健品、醫(yī)藥等方面的需要。PLD廣泛存在于細(xì)菌、真菌、植物、脊椎動物中，特別是來源于鏈霉菌的PLD，表現(xiàn)出較好的水解及轉(zhuǎn)酯活性。 本文以實驗室初
2、步篩選的產(chǎn)PLD菌株為出發(fā)菌株，首先根據(jù)PLD反應(yīng)的特點(diǎn)，采用TLC-Pp-NP法，實現(xiàn)酶活力的快速測定。然后在此基礎(chǔ)上，通過菌落水解圈法對菌種進(jìn)行自然選育，并通過紫外誘變篩選，搖瓶復(fù)篩，建立了一套PLD生產(chǎn)菌株的篩選方法。 通過搖瓶培養(yǎng)，對發(fā)酵培養(yǎng)基組分進(jìn)行優(yōu)化，確定了最佳碳源、最佳氮源。結(jié)果表明，葡萄糖為最佳碳源，牛肉膏及蛋白胨為最佳復(fù)合氮源。其濃度分別為：10.00g/l、5.00g/l、5.00g/l。最佳無機(jī)鹽為NaC
3、I、MgSO<,4>·7H<,2>O和CaCl<,2>，其最佳濃度分別為：3.00g/l、1.00g/l和3.00g/l，其中特別是CaCl<,2>的加入，能使酶活力提高7-8倍。最佳表面活性劑為Tween60，當(dāng)其濃度為16.30g/l時，可使酶活力提高10倍以上，使酶的最終水解活力達(dá)到5210 U/l。 在發(fā)酵培養(yǎng)基優(yōu)化的基礎(chǔ)上，本文還利用改變發(fā)酵溫度、pH、轉(zhuǎn)速等條件來提高鏈霉菌產(chǎn)酶。結(jié)果表明，最佳發(fā)酵周期為6天，最佳發(fā)酵
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