偽狂犬病毒在潛伏感染豬體內(nèi)的組織分布.pdf

1、本文為了建立潛伏感染動(dòng)物模型，通過ELISA方法對(duì)四周齡仔豬的血清進(jìn)行檢測(cè)，確定仔豬為PRV陰性仔豬后購(gòu)進(jìn)。進(jìn)欄3d后用豬偽狂犬病油乳劑滅活疫苗對(duì)仔豬進(jìn)行首次免疫，兩個(gè)星期后進(jìn)行二免。同時(shí)前腔靜脈采血，用中和試驗(yàn)檢測(cè)仔豬血清抗體水平。當(dāng)中和抗體效價(jià)為1：2或1：2以上時(shí)，則判為PRV抗體陽性，可以對(duì)仔豬進(jìn)行攻毒。TCID<,50>測(cè)定攻毒用的PRV標(biāo)記毒株gG<'->/LacZ<'+>的滴度為10<'-6.5>/0.1mL，從而確定攻毒

2、的量為滴鼻2 mL。攻毒后1-35d內(nèi)早上和下午分別采集攻毒實(shí)驗(yàn)豬的鼻拭子，同時(shí)進(jìn)行體溫測(cè)量。通過PCR方法對(duì)PRV的gD基因進(jìn)行檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)攻毒4d后豬不再排毒。攻毒后40d，對(duì)兩頭實(shí)驗(yàn)豬按2mg/kg的劑量肌肉注射地塞米松。 為了研究PRV潛伏感染時(shí)在組織內(nèi)的分布，通過頸靜脈放血，在攻毒后Odpi，7dpi，14dpi，21dpi，28dpi，35dpi等分別剖殺一頭實(shí)驗(yàn)豬。迅速取大腦、小腦、腦干、三又神經(jīng)、視神經(jīng)、扁桃體、肺

3、和腎等組織，一部分經(jīng)液氮冷凍后置-80℃保存，用于DNA、RNA和蛋白質(zhì)的提取與分析；另一部分放入4％多聚甲醛內(nèi)固定，經(jīng)系列濃度乙醇脫水，二甲苯透明，常規(guī)石蠟包埋切片，厚度為5μm。將切片分為兩套，一套做常規(guī)HE染色(粘片劑為蛋白甘油)，另一套做SABC染色(粘片劑為多聚賴氨酸)。 SABC染色觀察，結(jié)果表明，在神經(jīng)系統(tǒng)的大腦、小腦、腦干、三叉神經(jīng)、視神經(jīng)和非神經(jīng)組織的扁桃體、肺、腎等組織內(nèi)均發(fā)現(xiàn)陽性細(xì)胞。陽性細(xì)胞的數(shù)量隨攻毒時(shí)間的延長(zhǎng)

4、主要呈減少趨勢(shì)，但在注射地塞米松后，陽性細(xì)胞數(shù)量增加。病毒存在于被感染細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核內(nèi)，以細(xì)胞質(zhì)為主。所設(shè)對(duì)照實(shí)驗(yàn)，均未見到陽性細(xì)胞。 H．E染色觀察顯示，攻毒初期大腦出現(xiàn)明顯的非化膿性腦炎變化；小腦內(nèi)有血管反應(yīng)；視神經(jīng)出現(xiàn)萎縮；神經(jīng)細(xì)胞變性、壞死；扁桃體內(nèi)淋巴細(xì)胞壞死，數(shù)目減少；肺呈現(xiàn)間質(zhì)性肺炎變化，同時(shí)肺內(nèi)淋巴結(jié)內(nèi)的淋巴細(xì)胞高度增生；腎臟內(nèi)腎小球萎縮，淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)。以上病理變化隨攻毒時(shí)間延長(zhǎng)，病變減輕。但是注射地塞米松