HBV感染者免疫耐受期與免疫清除期PD-1表達(dá)變化及意義.pdf

1、目的:根據(jù)免疫學(xué)特點(diǎn),慢性乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染在臨床上可以分為三個(gè)時(shí)期,即免疫耐受期,免疫清除期,免疫控制期或非活動(dòng)攜帶狀態(tài)。目前HBV感染慢性化的確切機(jī)制尚不明確。HBV特異性T細(xì)胞功能低下可能是HBV感染慢性化的主要原因之一,而負(fù)性共刺激信號(hào)可導(dǎo)致T細(xì)胞功能低下。程序性死亡受體-1(programmed death-1,PD-1)及其配體PD-L1是重要的負(fù)性共刺激信號(hào),與CD8+T細(xì)胞失活

2、及病毒持續(xù)感染有關(guān)。最近的研究表明,在慢性HBV感染者中,病毒特異性CD8+T細(xì)胞表面的PD-1表達(dá)水平增加,阻斷PD-1/PD-L1信號(hào)通路后T細(xì)胞功能可得到一定程度恢復(fù)。雖然關(guān)于HBV感染患者PD-1表達(dá)水平和T細(xì)胞反應(yīng)變化的報(bào)道很多,慢性HBV感染的自然過(guò)程中免疫耐受期與免疫清除期患者PD-1的表達(dá)變化規(guī)律研究目前少見(jiàn)報(bào)道。本研究旨在探討PD-1在HBV感染者免疫耐受期與免疫清除期的表達(dá)變化及意義。
　　 方法:
　

3、　 選取慢性HBV感染者105例,其中免疫清除期患者55例,免疫耐受期患者50例,所有患者均行肝組織活檢,炎癥分級(jí)為G0～G4,纖維化程度分為S0～S4。健康對(duì)照15例。
　　 1:所有受試者留取新鮮外周靜脈血,密度梯度離心法分離PBMC,用PD-1-FITC抗體進(jìn)行染色,并以流式細(xì)胞儀檢測(cè)PBMC上PD-1表達(dá)水平,同時(shí)用HLA-A2抗體進(jìn)行染色,流式細(xì)胞儀行HLA-A2型別鑒定。
　　 2:選取HLA-A2陽(yáng)性的受

4、試者(免疫清除期患者30例,免疫耐受期患者30例,正常人10例),密度梯度離心法分離PBMC,用pentamer-PE、CD3-ECD、CD8-PE-Cy5、PD-1-FITC抗體進(jìn)行染色,并以流式細(xì)胞儀檢測(cè)HLA-A2陽(yáng)性的HBV特異性CD8+T細(xì)胞占總的CD8+T細(xì)胞比例及其PD-1表達(dá)。
　　 結(jié)果:
　　 1:不同臨床分期慢性HBV感染者PBMC及HBV特異性CD8+T細(xì)胞上PD-1的表達(dá)變化:免疫耐受組PBMC

5、及HBV特異性CD8+T細(xì)胞上PD-1表達(dá)明顯高于免疫清除組與正常對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05或P＜0.01)。
　　 2:不同臨床分期慢性HBV感染者HBV特異性CD8+T細(xì)胞表達(dá)變化:免疫清除組HBV特異性CD8+T細(xì)胞表達(dá)明顯高于免疫耐受組與正常對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.01)。
　　 3:HBV特異性CD8+T細(xì)胞數(shù)量與其PD-1表達(dá)的相關(guān)性:HBV特異性CD8+T細(xì)胞數(shù)量與其PD-1表達(dá)呈負(fù)相

6、關(guān)(r=-0.463,P＜0.01)。
　　 4:HBV特異性CD8+T細(xì)胞上PD-1表達(dá)與HBV DNA的關(guān)系:按HBV DNA水平將研究對(duì)象分為＜3 log10、3-6 log10和＞6 log10三組。＞6 log10組HBV特異性CD8+T細(xì)胞上PD-1表達(dá)較＜3 log10組和3-6 log10組明顯增高(F=82.94,P＜0.01)。相關(guān)性分析顯示HBV特異性CD8+T細(xì)胞上PD-1表達(dá)與HBV DNA呈正相關(guān)(r

7、=0.882,P＜0.01)。
　　 5:免疫清除組HBV特異性CD8+T細(xì)胞上PD-1表達(dá)與血清ALT水平的相關(guān)性;按ALT水平將研究對(duì)象分為＜3倍、3-10倍和＞10倍正常值三組。結(jié)果:三組之間PD-1表達(dá)無(wú)明顯差異(P＞0.05)。相關(guān)性分析顯示HBV特異性CD8+T細(xì)胞上PD-1表達(dá)與ALT無(wú)相關(guān)(r=0.085,P＞0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 1:慢性HBV感染者中免疫耐受期患者HBV特異性CD8

8、+T細(xì)胞表達(dá)較免疫清除期患者明顯減少,提示HBV特異性CD8+T細(xì)胞在清除HBV中發(fā)揮重要作用。
　　 2:慢性HBV感染者中免疫耐受期患者HBV特異性CD8+T細(xì)胞上PD-1的表達(dá)明顯高于免疫清除期,提示PD-1的高表達(dá)可能影響HBV特異性CD8+T細(xì)胞的活化。
　　 3:在慢性HBV感染者中,HBV特異性CD8+T細(xì)胞上PD-1表達(dá)與HBV特異性CD8+T細(xì)胞表達(dá)呈負(fù)相關(guān),說(shuō)明PD-1通過(guò)抑制HBV特異性CD8+T細(xì)