二斑葉螨抗藥性監(jiān)測及分子檢測技術(shù)研究.pdf

1、二斑葉螨（Tetranychus urticae Koch）是危害農(nóng)作物的重要害螨，寄主植物廣泛，包括蔬菜、果樹、棉花以及觀賞作物等，其主要通過成若螨聚集植物葉片背部取食葉片汁液，破壞植物細(xì)胞，吐絲結(jié)網(wǎng)最后造成植株發(fā)黃葉片凋落甚至死亡，給農(nóng)作物帶來了嚴(yán)重危害。二斑葉螨對化學(xué)藥劑的抗藥性發(fā)展很快，目前已對多種不同種類的殺蟲劑產(chǎn)生了不同程度的抗藥性，不同地理種群的抗藥性現(xiàn)狀不明確阻礙了對該螨的科學(xué)合理防控。本研究中，首先建立了葉螨生物測定新

2、方法—藥管葉膜法，監(jiān)測明確了不同地區(qū)二斑葉螨種群對10種殺蟲殺螨劑的抗性水平，然后檢測了不同種群中對阿維菌素、聯(lián)苯菊酯抗藥性相關(guān)基因的突變頻率，最后克隆獲得了二斑葉螨谷氨酸氯離子通道（GluCl）基因、γ-氨基丁酸受體（GABAR1和GABAR2）基因的全長序列，研究明確抗性基因在室內(nèi)相對敏感種群和田間種群中的相對表達(dá)量差異，分析其與二斑葉螨抗藥性的相關(guān)性。研究結(jié)果為二斑葉螨的科學(xué)的化學(xué)防控具有重要指導(dǎo)意義。主要研究內(nèi)容和結(jié)果如下:

3、r>　　一、二斑葉螨生測方法的改良及對田間種群的抗藥性監(jiān)測
　　本研究改良了一種新的葉螨生物測定方法—藥管浸葉法（簡稱VLD），即采用2 mL的離心管和直徑為1 cm的寄主葉片同時浸藥再飼喂葉螨的方法，可充分發(fā)揮其藥劑的觸殺和胃毒活性，測定方法操作簡單而且重復(fù)性高。分別采用傳統(tǒng)的玻片浸漬法（簡稱SD）與藥管浸葉法測定5種殺蟲殺螨劑對室內(nèi)截形葉螨（T. truncatus）種群的毒力，結(jié)果表明，與玻片浸漬法相比，采用藥管浸葉法測定截

4、形葉螨對藥劑表現(xiàn)更為敏感，毒力測定的結(jié)果更低。之后采用VLD方法監(jiān)測了不同二斑葉螨田間種群雌成螨對10種殺蟲殺螨劑的抗性水平，結(jié)果表明不同種群對藥劑的敏感度不一樣，六個田間種群均對阿維菌素產(chǎn)生了極高的或中高等水平的抗性；乙基多殺菌素對二斑葉螨各種群毒力較高；除了山西運城種群對聯(lián)苯肼酯產(chǎn)生了中等水平的抗性外，其他種群對聯(lián)苯肼酯均表現(xiàn)為敏感度下降或者低等水平抗性。
　　二、二斑葉螨對聯(lián)苯菊酯和阿維菌素抗性的快速分子檢測技術(shù)
　　

5、克隆獲得了二斑葉螨鈉離子通道III S6基因以及GluCl基因片段，基于該片段中包含的抗性和敏感種群中的點突變位點成功建立了二斑葉螨對聯(lián)苯菊酯和阿維菌素的等位基因特異性PCR（PASA）技術(shù)，PASA檢測結(jié)果表明，二斑葉螨室內(nèi)相對敏感種群中均存在雜合子個體，F(xiàn)1538I點突變頻率為10.0％，G323D點突變頻率為1.67%；而北京通縣和海南三亞種群中F1538I點突變頻率則分別達(dá)50.0%和53.3%，北京密云種群的G323D點突變頻

6、率高達(dá)91.7%；線性分析結(jié)果表明，二斑葉螨不同種群抗性倍數(shù)與F1538I點突變頻率相關(guān)性不顯著，而抗性倍數(shù)與G323D點突變頻率之間呈顯著的正相關(guān)。
　　三、二斑葉螨敏感和抗性種群中抗阿維菌素抗性相關(guān)基因mRNA的表達(dá)
　　在測定了室內(nèi)相對敏感種群和田間種群對阿維菌素抗藥性的基礎(chǔ)上，比較了這兩個種群中抗阿維菌素可能相關(guān)的受體基因GluCl和GABAR基因的表達(dá)量差異，結(jié)果表明，田間二斑葉螨抗性種群中，GluCl和GABAR