山羊卵母細(xì)胞和孤雌激活胚胎體外無血清培養(yǎng)的研究.pdf

1、本文為研究山羊卵母細(xì)胞和孤雌激活胚胎在無血清成熟液和培養(yǎng)液中的成熟、發(fā)育情況而做了兩個(gè)實(shí)驗(yàn)：(1)山羊卵母細(xì)胞無血清體外成熟培養(yǎng)；(2)山羊孤雌激活胚胎無血清體外培養(yǎng)。實(shí)驗(yàn)的目的是為避免血清對(duì)卵母細(xì)胞和胚胎的副作用和不利影響而建立一種山羊胚胎的無血清體外培養(yǎng)體系。 1.在OM成熟液中分別以0.3％牛血清蛋白(BSA)(m/v)、1％聚乙烯醇(PVA)(m/v)和1％胰島素轉(zhuǎn)鐵蛋白亞硒酸鈉(ITS)(v/v)代替成熟培養(yǎng)液中胎牛血

2、清(FBS)，以添加5％FBS的OM為對(duì)照組，對(duì)來源于屠宰場(chǎng)的卵丘卵母細(xì)胞復(fù)合體(COCs)進(jìn)行體外培養(yǎng)。成熟率PVA添加組(50.00％)，極顯著低于FBS組(83.23％)(P<0.01)，BSA組(71.19％)和ITS組(76.79％)與FBS組無顯著差異(P>0.05)；成熟卵母細(xì)胞用離子霉素聯(lián)合6-DMAP激活，在ScFaa中進(jìn)行孤雌胚培養(yǎng)，BSA、PVA、ITS及FBS各組的卵裂率依次為61.90％、46.97％、79.0

3、7％和83.58％，囊胚率分別為25.00％、19.70％、55.81％和60.45％。結(jié)果表明：在OM基礎(chǔ)培養(yǎng)液中添加BSA或PVA，卵母細(xì)胞的成熟率明顯低于添加FBS，且卵裂率和囊胚發(fā)育率也低于對(duì)照組(P<0.05或P<0.01)；添加ITS，卵母細(xì)胞成熟率雖低于對(duì)照組，但孤雌胚卵裂率和囊胚發(fā)育率與對(duì)照組接近(P>0.05)。 2.在SoFaa胚胎培養(yǎng)液中分別添加1％ITS(v/v)、0.6％BSA(m/v)和0.1％PVA

4、(m/v)，以0.6％BSA(m/v)+10％FBS(v/v)為對(duì)照組，共分為四組對(duì)用離子霉素聯(lián)合6-DMAP孤雌激活的卵母細(xì)胞進(jìn)行體外培養(yǎng)。在加入ITS、BSA、PVA和BSA+FBS組的卵裂率分別為82.27％、75.10％、72.57％和80.29％；囊胚率分別為38.76％、13.81％、7.73％和56.82％。結(jié)果表明：在SoFaa中加入ITS組的山羊孤雌激活胚胎第一次卵裂率與加入BSA、PVA和BSA+FBS組的差異不顯著

5、(P>0.05)；而囊胚率雖然極顯著高于BSA和PVA組(P<0.01)，但是也極顯著低于加入BSA+FBS組(P<0.01)。 結(jié)論： (1)在本實(shí)驗(yàn)條件下，在OM成熟液中添加ITS可以使卵母細(xì)胞很好的成熟，表明以ITS代替FBS，可用于山羊卵母細(xì)胞體外成熟培養(yǎng)。 (2)在胚胎培養(yǎng)液SoFaa中添加ITS得到略高于其它組的卵裂率(P>0.05)，所以ITS可代替BSA+FBS用于胚胎第一次卵裂前后的培養(yǎng)；但是由