表達(dá)FasL基因Hela細(xì)胞誘導(dǎo)淋巴細(xì)胞凋亡的研究.pdf

1、目的：應(yīng)用FasL基因轉(zhuǎn)染具有上皮細(xì)胞特性的Hela細(xì)胞，探討FasL基因的表達(dá)對誘導(dǎo)淋巴細(xì)胞凋亡的作用，為解決同種異體組織工程化皮膚的免疫排斥問題提供一條研究途徑。　　方法：將pLNCX2-FasL質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌，抽提純化的pLNCX2-FasL質(zhì)粒用限制性內(nèi)切酶XhoI，NotI酶切，瓊脂糖凝膠電泳得到755kp大小的目的條帶。在紫外燈下切割回收目的條帶并抽提純化得到FasL基因，用XhoI，NotI酶切pCDNA3.1質(zhì)粒載體

2、并在相同位點(diǎn)插入FasL基因；T4DNA酶連接，構(gòu)建pCDNA3.1-FasL重組質(zhì)粒。利用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法將pCDNA3.1-FasL基因轉(zhuǎn)染Hela細(xì)胞，G418篩選；篩選后的Hela細(xì)胞經(jīng)過免疫細(xì)胞化學(xué)法，RT-PCR鑒定后，實(shí)驗(yàn)組和對照組與同種異體淋巴細(xì)胞共培養(yǎng)后，進(jìn)行了淋巴細(xì)胞染色體DNA斷裂測定、淋巴因子RT-PCR、淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)、單項(xiàng)淋巴細(xì)胞混合試驗(yàn)等實(shí)驗(yàn)，檢測了FasL基因?qū)φT導(dǎo)淋巴細(xì)胞凋亡的作用?！　?主要結(jié)論：表達(dá)Fa