花生PYM離體誘變及耐鹽抗旱突變體的篩選研究.pdf

1、J’Y●‘一Studies0nInvitroMutagenesisUsingPYMandDirectedScreeningforSaltandHYPtolerantMutantsinPeanutsThesissubmittedtoInFulfillmentoftheRequirementfortheDegreeofMasterofScienceSunHaiyan(CollegeofLifeSciences)Supervisor：Prof

2、WangJingshanQingdao。ChinaJune，2013青島農業(yè)大學碩士學位論文摘要摘要花生是重要的油料作物和經(jīng)濟作物，培育高產優(yōu)質抗逆性花生新品種對提高花生產值有著重要意義。但當前花生栽培種的遺傳基礎狹窄問題愈來愈突出，已經(jīng)在很大程度上限制了花生育種獲得突破性進展。本研究在前期研究確立的花生體胚誘導及高頻率植株再生體系和確立的適宜平陽霉素(PYM)誘變濃度基礎上，以PYM作為誘變劑進行了花生離體誘變及定向篩選抗旱耐鹽突變體

3、的研究，并對其再生植株后代的特征特性進行了研究，旨在為創(chuàng)造花生新種質、開拓花生新的育種途徑奠定基礎。主要研究內容如下：1耐鹽突變體的離體誘變及定向篩選以花生品種花育22號成熟種子胚小葉為外植體，置于添加4mg／LPYM的體胚誘導培養(yǎng)基中培養(yǎng)4周，體胚誘導及誘變處理同時進行。將形成體胚的外植體先后轉移到添加15g／L和20g／LNaCl的體胚萌發(fā)培養(yǎng)基中進行定向篩選耐鹽突變體。獲得的NaCl耐性苗2011年經(jīng)嫁接移栽田間，成熟后按單株收獲

4、種子。2012年將種子按單株播種，苗期、生長發(fā)育期及成熟收獲后觀察結果顯示，26個NaCI耐性再生植株后代(M2代)中，23個再生植株后代在生長勢、株型、開花習性，莢果形狀、種皮顏色等方面與誘變親本不同，明顯表現(xiàn)出變異及性狀發(fā)生分離。對M2代收獲的部分種子(M3代)置于07％NaCI的鹽溶液中進行發(fā)芽期耐鹽鑒定，參試的18個NaCl耐性再生植株的后代中，6個植株的后代發(fā)芽率極顯著高于誘變親本。利用39對引物對19個耐性再生植株的后代及誘

5、變親本進行SSR檢測分析，均表現(xiàn)出多態(tài)性。結果表明PYM離體誘變結合NaCl定向篩選是獲得花生耐鹽突變體的有效途徑。2抗旱突變體的離體誘變及定向篩選以花生品種花育20號、花育22號扣花育25號種子胚小葉為誘變培養(yǎng)材料，以上述同樣方法進行誘變處理。將成活形成體胚的外植體先后轉移到添加4mg／L和8mg／L羥脯氨酸(HYP)的體胚萌發(fā)培養(yǎng)基上定向篩選抗逆突變體。獲得的HYP抗性苗于2011年經(jīng)嫁接馴化后移栽田間，收獲的種子2012年種植田間

6、。觀察結果表明，大部分植株后代發(fā)生變異和分離。對M3代種子發(fā)芽期及苗期進行干旱脅迫處理后，取葉片測定SOD活性和POD活性，結果顯示，花育20號有8個再生植株的后代，花育22號和花育25號分別有l(wèi)株的后代SOD活性和POD活性均分別顯著高于誘變親本。對18個耐HYP再生植株的后代(13個來自于花育20號、2個來自于花育22號、3個來自于花育25號)進行SSR檢測分析，驗證植株性狀變化是否由基因突變引起。SSR檢測分析表明，與誘變親本相比