靈芝活性成分的提取工藝及抗腫瘤成分的研究.pdf

1、本論文以獲得赤靈芝子實(shí)體中多糖和麥角甾醇為目標(biāo),研究了二者的最佳提取工藝條件,并建立了二者的含量測(cè)定方法.這對(duì)于靈芝的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制定以及靈芝的綜合利用有著重大的現(xiàn)實(shí)意義. 經(jīng)單因素和正交試驗(yàn),各因素對(duì)靈芝多糖提取效果影響順序?yàn)樘崛〈螖?shù)>提取溫度>提取時(shí)間>溶劑體積,并且提取時(shí)間,提取溫度以及提取次數(shù)對(duì)多糖的提取具有顯著影響.確定靈芝多糖的最佳提取工藝條件為:在60倍溶劑量(v/w),90℃條件下,提取4次,每次3.5個(gè)小時(shí).

2、 多糖的含量測(cè)定方法:采用苯酚.硫酸法,以葡萄糖為標(biāo)準(zhǔn)品,在紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)上于485nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度,以吸光度值為縱坐標(biāo),葡萄糖加入量為橫坐標(biāo),進(jìn)行回歸處理,得線性回歸方程A=10.559C+0.0019(R=0.9991). 表明其在20～120μg線性關(guān)系良好. 靈芝麥角甾醇提取的影響因素中,回流提取的次數(shù)影響最大,其次是回流提取的時(shí)間,最后是溶劑的用量(影響排序?yàn)?提取次數(shù)>提取時(shí)間>溶劑體積). 在本

3、實(shí)驗(yàn)的考察范圍內(nèi),三因素對(duì)麥角甾醇的提取都有顯著影響.最佳提取工藝條件為:用10倍的溶劑量,在80℃回流狀態(tài)下,提取三次,每次1.5h. 麥角甾醇的含量測(cè)定方法:利用HPLC測(cè)定麥角甾醇的含量.色譜條件:色譜柱為kromasil-ODS C18(4.6×150mm；5μm)；流動(dòng)相為甲醇；流速1ml/min； 柱溫為室溫25℃；檢測(cè)波長(zhǎng)282nm.以峰面積對(duì)濃度進(jìn)行回歸y=32767x-233.91(R=0.9996),表明其在

4、20～400μg線性關(guān)系良好. 同時(shí),以溶劑提取法、硅膠柱層析法以及制備HPLC等將現(xiàn)代化的分離手段與傳統(tǒng)的提取方法相結(jié)合,對(duì)靈芝子實(shí)體進(jìn)行了提取、分離及分析鑒定.從赤靈芝子實(shí)體的石油醚層和乙酸乙酯層共分離得到22個(gè)單體化合物,經(jīng)過(guò)<'1>H-NMR,<'13>C-NMR方法鑒定了其中的5個(gè)單體化合物的結(jié)構(gòu).這些化合物分別是麥角甾醇(1),靈芝醇B(2),以及過(guò)氧化麥角甾醇(3),根據(jù)現(xiàn)有氫譜和碳譜數(shù)據(jù)推測(cè)了其它兩個(gè)化合物結(jié)構(gòu).