臍血單個(gè)核細(xì)胞分化為樹突狀細(xì)胞的研究.pdf

1、目的：通過兩步法分別研究兩種不同細(xì)胞因子組合FST組(FL+SCF+TPO)、FST6組(FL+SCF+TPO+IL-6)誘導(dǎo)臍血單個(gè)核細(xì)胞(CB-MNC)分化為樹突狀細(xì)胞(DC)的可行性及比較兩者誘導(dǎo)擴(kuò)增的效率,試圖建立DC高效擴(kuò)增體系。
　　方法：以健康孕婦的臍血為DC來源,采用兩種不同細(xì)胞因子組合FST組(FL+SCF+TPO)、FST6組(FL+SCF+TPO+IL-6)誘導(dǎo)擴(kuò)增DC。采用倒置顯微鏡對(duì)細(xì)胞進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察、流

2、式細(xì)胞儀檢測其誘導(dǎo)擴(kuò)增的DC表面分子表達(dá)、混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)(MLR)及ELISA法檢測誘導(dǎo)擴(kuò)增后獲取的DC培養(yǎng)液上清中分泌IL-12、IL-10的濃度研究擴(kuò)增后的DC細(xì)胞功能,比較同等條件下兩組間誘導(dǎo)產(chǎn)生DC的效率。
　　結(jié)果:
　　1.上述兩組不同細(xì)胞因子組合均能成功誘導(dǎo)出DC:FST組培養(yǎng)的DC表面分子表達(dá)分別為CD1a(11.83±3.45)％、CD83(31.15±8.35)%、CD11c(95.18±2.92)%、

3、CD40(93.10±5.26)%、CD86(86.24±7.17)%;FST6組培養(yǎng)的DC表面分子表達(dá)分別為CD1a(13.62±4.05)%、CD83(27.82±8.81)%、CD11c(83.29±5.31)%、CD40(85.30±6.85)%、CD86(78.86±2.23)%。
　　2.FST組經(jīng)上述條件培養(yǎng)所收獲上述表型的細(xì)胞(2.03±0.13)×106個(gè),FST6組收獲上述表型的細(xì)胞(2.58±0.11)×10

4、6個(gè)細(xì)胞,兩組間所收獲的DC數(shù)量比較,FST6組誘導(dǎo)DC的效率較FST組高(P<0.05)。
　　3.上述兩組擴(kuò)增體系所誘導(dǎo)的DC具有典型的樹突樣突起,形態(tài)上相似。FST組誘導(dǎo)獲得的DC與外周血非貼壁細(xì)胞在1:80、1:40、1:20、1:10的比列混合培養(yǎng)情況下放射性核素值(CPM值)分別為1660±24、8380±56、12024±32、8250±13,FST6組誘導(dǎo)獲得的DC與外周血非貼壁細(xì)胞在1:80、1:40、1:20、

5、1:10的比列混合培養(yǎng)情況下CPM值分別為1730±16、8053±46、11920±27、8440±31,兩組對(duì)淋巴細(xì)胞均具有激發(fā)和促增殖作用,且在1:20時(shí)刺激效應(yīng)最大。FST組分泌的IL-12、IL-10分別為354.23±11.33 pg/ml、32.37±7.74pg/ml,FST6組分泌的IL-12、IL-10分別為361.77±9.31 pg/ml、30.50±5.50pg/ml,FST組和FST6組兩組培養(yǎng)的DC均能夠分