仙茅組織培養(yǎng)和人工種子研究.pdf

1、仙茅是我國(guó)一味使用了千年的中藥，主要治療陽痿、筋骨萎軟、腰膝冷痹、陽虛冷瀉等癥狀，是非常寶貴的中藥材。野生仙茅因人為和牲畜的破壞，導(dǎo)致數(shù)量急劇減少;但其作為中藥材和保健品原料，市場(chǎng)需求卻越來越大，野生仙茅數(shù)量已經(jīng)無法滿足人們的需要;目前人工方法栽培仙茅已經(jīng)表現(xiàn)出極大的現(xiàn)實(shí)經(jīng)濟(jì)價(jià)值。傳統(tǒng)培育仙茅的方式工作量大，成活率低，且浪費(fèi)了大量?jī)?yōu)質(zhì)仙茅。本論文研究了仙茅更高效、便捷的繁育方式，利用植物組織培養(yǎng)育苗和人工種子技術(shù)育苗，在一定程度上解決了

2、仙茅產(chǎn)量不足的問題，具有較大的現(xiàn)實(shí)意義。
　　本論文來源于國(guó)家林業(yè)公益性行業(yè)科研專項(xiàng)項(xiàng)目《仙茅、雞血藤資源培育及林下種植技術(shù)研究》，項(xiàng)目編號(hào)201304807。目前市場(chǎng)上仙茅的品種很多，本研究基于的是栽培于廣州從化的四川宜賓野生仙茅。通過設(shè)置單因素試驗(yàn)、正交試驗(yàn)等探究了快速得到仙茅植株的三條途徑。以仙茅幼葉誘導(dǎo)愈傷組織得到完整植株;由不定芽制作人工種子得到完整植株;利用仙茅的細(xì)胞懸浮培養(yǎng)，誘導(dǎo)出胚狀體制作人工種子，以得到完整植株。

3、實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明三種方式均具有可行性:
　　正交試驗(yàn)和單因素試驗(yàn)結(jié)果表明，MS基本培養(yǎng)基中加入0.1mg/L的2，4-D、1.5mg/L的KT，3％的多菌靈和8mg/L的檸檬酸，誘導(dǎo)出的仙茅愈傷組織效果最好，可達(dá)96％。方差分析得知2，4-D、KT、多菌靈的濃度對(duì)仙茅出愈率的影響差異極顯著，6-BA濃度和NAA濃度對(duì)出愈率影響差異極顯著。繼代培養(yǎng)基為MS加入0.3mg/L的NAA，2mg/L的6-BA，0.3mg/L的2，4-D，繼代

4、效果最好，增殖率最高，愈傷組織的質(zhì)量最好，較易誘導(dǎo)出不定芽。在培養(yǎng)基中添加0.3mg/L的NAA有利于生根，移栽至營(yíng)養(yǎng)土中的成活率可達(dá)到90％以上。
　　在人工胚乳中加入0.05 mg/L6-BA，0.8mg/L NAA制作的人工種子萌發(fā)率可達(dá)到93％，添加3mg/L多菌靈時(shí)人工種子的染菌率最低。對(duì)比試驗(yàn)表明包兩層膜的人工種子比包一層膜的人工種子，保水性和機(jī)械性都更好。當(dāng)海藻酸鈉濃度為3％時(shí)，制作的人工種子質(zhì)量最好，大小相同，軟硬

5、合適。以2％的CaCl2為固化劑，反應(yīng)兩次，第一次固化5分鐘，第二次固化10分鐘，制成的人工種子形態(tài)狀況最好，顆粒均勻，軟硬適中，呈球形，透明有彈性。
　　愈傷組織繼代時(shí)，培養(yǎng)基蔗糖濃度為15g/L，6-BA濃度為2mg/L、NAA濃度為0.5mg/L時(shí)，可得到疏松易碎適合做懸浮細(xì)胞的愈傷組織。正交試驗(yàn)探究非激素水平對(duì)細(xì)胞懸浮培養(yǎng)影響結(jié)果表明:蔗糖影響懸浮細(xì)胞形態(tài)，MES對(duì)懸浮培養(yǎng)液的PH值影響較大，對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析得知，不同濃

6、度的蔗糖、水解酪蛋白、MES、脯氨酸對(duì)仙茅細(xì)胞懸浮培養(yǎng)影響的差異極顯著。探究激素對(duì)細(xì)胞懸浮培養(yǎng)的影響時(shí)發(fā)現(xiàn)，2，4-D影響懸浮細(xì)胞結(jié)構(gòu)，當(dāng)2，4-D濃度為0.5mg/L時(shí)，胚性細(xì)胞數(shù)量達(dá)到最大值。細(xì)胞的生長(zhǎng)隨著培養(yǎng)時(shí)間的變化呈現(xiàn)“S”形曲線，接種量對(duì)懸浮培養(yǎng)的影響最大，接種量為15％是仙茅細(xì)胞懸浮培養(yǎng)的最適接種量。
　　本論文以組織培養(yǎng)育苗，替代傳統(tǒng)的根莖繁殖，成功建立了仙茅組織培養(yǎng)繁殖體系，可將其應(yīng)用于仙茅的大規(guī)模生產(chǎn)，解決目前