蟾蜍水提物誘導人肝癌SMMC7721細胞凋亡的初步研究.pdf

1、目的：　　觀察蟾蜍水提物(Water-soluble extract cornponents of Toad，WECT)對人肝癌細胞株SMMC7721細胞增殖及凋亡情況的影響；檢測蟾蜍水提物對SMMC7721細胞株細胞周期的影響，并對其誘導凋亡的相關作用機制進行初步探討。 方法： 以不同濃度的蟾蜍水提物作用于肝癌細胞株SMMC7721，應用噻唑藍還原法(MTT)檢測蟾蜍水提物對肝癌細胞株SMMC7721細胞增殖的抑制作

2、用及細胞毒作用；應用倒置顯微鏡觀察蟾蜍水提物對SMMC7721細胞形態(tài)學的影響；Annexin V/PI雙染色法檢測蟾蜍水提物干預后SMMC7721細胞凋亡及壞死的情況；dUTP缺口末端標記技術，即TUNEL法檢測蟾蜍水提物干預后SMMC7721細胞的早期凋亡；流式細胞術分析SMMC7721細胞經藥物作用后其周期分布情況的變化。 結果： (1)．蟾蜍水提物可以明顯抑制細胞分裂增殖，其半數(shù)抑制濃度約0.065mg/ml，隨

3、著濃度增加誘導細胞凋亡時間縮短，程度增加； (2)蟾蜍水提物能顯著抑制SMMC7721細胞生長，生長曲線顯示W(wǎng)ECT組細胞的增殖速度遠慢于對照組，不同時段的wECT組細胞抑制率也明顯升高(P<0.05)；干預后的SMMC7721細胞出現(xiàn)了典型的病理變化，細胞形態(tài)由多邊形變成圓形，染色質疏松，細胞核溶解，形態(tài)學改變具有時間依賴性。 (3)細胞凋亡與WECT程濃度和時間依賴關系，隨著濃度的增加及時間的延長細胞凋亡比例明顯增加

4、，與空白對照有顯著差異(P<0.05)。 (4)流式細胞儀測定顯示細胞周期發(fā)生明顯改變，細胞分裂阻滯在S期，與空白對照組比較有顯著差異性(P<0.05)。 結論： 1.0.008mg/mL及以上濃度蟾蜍水提物對人肝癌SMMC7721細胞具有顯著細胞毒作用，形態(tài)學和DNA片段化檢測證實蟾蜍水提物誘導的細胞死亡以凋亡為主； 2．蟾蜍水提物對肝癌SMMC7721細胞增殖抑制作用呈濃度、時間依賴性，24、48和7