肝動脈性缺氧肝損傷機制及高壓氧治療的研究與臨床觀察.pdf

1、本課題采用肝臟冷缺血再灌注肝動脈結(jié)扎大鼠模型：1、觀察肝臟組織血流及病理變化。2、探討肝臟缺氧時HIF-1αmRNA、HIF-1α蛋白表達規(guī)律及在肝臟低氧損傷中的作用。3、探討p53蛋白表達與肝細胞凋亡在肝低氧損傷中的作用。4、闡述iNOSmRNA表達、iNOS、NO在低氧肝損傷中的意義。5、探討HBO對肝動脈性肝臟低氧的保護作用。6、觀察HBO對肝移植HAT病人的治療效果。本課題通過以上研究，旨在深入探討肝臟動脈缺血低氧損傷機制及HB

2、O治療的機制，初步嘗試HBO治療HAT，為臨床應(yīng)用HBO治療肝臟缺氧性損傷及肝移植后HAT提供理論依據(jù)。 方法：雄性SD大鼠96只，隨機分為3組：對照組，肝動脈結(jié)扎組(HAL)及高壓氧治療組(HBO)。各組均行剖腹術(shù)，肝臟骨骼化及肝素林格氏液肝臟灌注，后2組行肝動脈結(jié)扎術(shù)。高壓氧組于術(shù)后2小時行高壓氧治療，每次吸純氧60分鐘，2次/日。治療壓力為0.25Mpa(2.5個絕對大氣壓)。術(shù)后1天、3天、7天、14天留取肝臟及血標(biāo)本。

3、采用激光多譜勒測定術(shù)前及術(shù)后肝組織血流變化；RT-PCR方法檢測肝臟組織HIF-1αmRNA、iNOSmRNA表達水平；TUNEL法檢測肝細胞凋亡；免疫組織化學(xué)方法檢測肝組織HIF-1α及p53蛋白表達水平；檢測肝組織iNOS、NO水平及血清iNOS、NO、ALT水平。另外，對臨床4例肝移植術(shù)后HAT患者行HBO治療并進行隨訪，觀察HBO治療前后血清肝功能變化及影像學(xué)變化。 結(jié)果：1、冷缺血再灌注HAL組及HBO組大鼠復(fù)流后，肝

4、組織血流下降約22％，與對照組相比，差異顯著。術(shù)后14天，HBO組肝血流接近對照組水平，較HAL組肝血流有明顯增高(4.22±0.31Vvs3.62±0.49V)。2、HAL組肝臟HIF-1αmRNA水平及HIF-1α蛋白較對照組明顯增高，免疫組化顯示HIF-1α陽性細胞主要位于肝中央靜脈周圍。HBO組HIF-1αmRNA、HIF-1α降至對照組水平，峰值較HAL組顯著降低。3、HAL組肝組織p53蛋白表達較對照組及HBO組明顯增多，陽

5、性細胞主要位于肝中央靜脈周圍，HBO組肝組織p53標(biāo)記指數(shù)高于對照組水平。4、HAL組肝組織iNOSmRNA峰值較對照組升高，肝組織及血清iNOS、NO水平較對照組升高，其中血清水平更高。HBO組肝組織iNOSmRNA表達較HAL組明顯下降，肝組織及血清iNOS、NO水平較HAL組明顯降低。5、HAL組凋亡指數(shù)、血清轉(zhuǎn)氨酶水平較對照組及HBO組均明顯增高。HBO組病理損傷較HAL組輕。6、4例肝移植術(shù)后HAT患者接受HBO治療后，2例隨

6、訪1年肝功能正常，未見肝壞死及膽道并發(fā)癥。2例治療后肝功能有明顯改善，肝壞死好轉(zhuǎn)。 結(jié)論：1、肝動脈結(jié)扎后造成肝臟缺血缺氧，以肝中央靜脈周圍肝細胞缺氧為主，肝細胞凋亡增加，高壓氧治療可明顯改善肝臟血流，減少細胞凋亡，保護肝臟功能。2、HIF-1α基因調(diào)控及蛋白調(diào)控均參與冷缺血再灌注肝動脈結(jié)扎肝臟低氧損傷過程。高壓氧治療增加肝臟氧供，抑制HIF-1αmRNA表達及HIF-1α積聚。3、HIF-1α上調(diào)p53表達，p53協(xié)同HIF-

7、1α誘導(dǎo)肝細胞凋亡，造成肝損害。高壓氧促進p53降解，阻斷HIF-1α、p53協(xié)同效應(yīng)，減少肝細胞凋亡，減輕肝損害。4、iNOSmRNA為HIF-1α調(diào)控基因，肝動脈結(jié)扎上調(diào)iNOSmRNA表達，iNOS合成增加，肝組織NO水平升高，直接發(fā)揮細胞毒性作用。高壓氧下調(diào)iNOSmRNA，抑制iNOS，減少NO的生成，從而發(fā)揮保護性作用。5、HBO治療可預(yù)防肝移植后HAT引起的肝壞死及膽道并發(fā)癥，對HAT引起的肝膿腫有協(xié)同治療作用。提示對肝膽