食物過敏原特異性IgE檢測方法的建立及臨床應(yīng)用的研究.pdf

1、目的:研制一種能同時檢測多種食物過敏原特異性IgE的檢測條，并探討其在過敏性疾病診斷中的應(yīng)用價值，為臨床提供一種高效實(shí)用的過敏原特異性IgE檢測的新技術(shù)。 方法: 1．制備蛋白、牛奶、小麥、花生、黃豆、腰果、蟹、蝦等八種常見食物過敏原的提取液，測定提取液的蛋白質(zhì)濃度并進(jìn)行濃縮處理及SDS-PAGE分析。 2．選用硝酸纖維素膜（NC膜）作為固相載體，對過敏原的包被條件和檢測條件進(jìn)行優(yōu)化。選用患者陽性血清進(jìn)行檢測，正

2、常人血清及胎牛血清作為陰性對照，選擇陽性血清顯色清晰且正常人血清及胎牛血清背景干凈的組合條件作為最佳制備條件和檢測條件。 3．根據(jù)優(yōu)化結(jié)果制備可同時檢測八種過敏原的檢測條，并對檢測條的靈敏性、重復(fù)性和穩(wěn)定性進(jìn)行檢測。 4．將研制的檢測條按照優(yōu)化結(jié)果對210份患者血清和30份正常人血清進(jìn)行檢測，并與Allergyscreen過敏原檢測系統(tǒng)的檢測結(jié)果進(jìn)行對比分析。 結(jié)果:以硝酸纖維素膜（NC膜）作為固相載體，八種食物

3、過敏原除點(diǎn)樣濃度有不同外，其它制備條件和檢測條件均相同。八種過敏原的最佳點(diǎn)樣濃度分別為：蛋白0．25mg/ml、牛奶1mg/ml、小麥1mg/ml、花生1mg/ml、黃豆1mg/ml、腰果1mg/ml、蟹0．25mg/ml、蝦0．25mg/ml。檢測條制備和檢測的最佳條件與過程為：以NC膜為固相載體，按照每種過敏原的最佳點(diǎn)樣濃度點(diǎn)樣一次，室溫下包被2小時，2%PVA室溫下封閉1小時，待檢血清1：10稀釋，與檢測條在搖床上室溫下反應(yīng)2小時

4、，洗膜，加入濃度為2μg/ml的堿性磷酸酶（AP）標(biāo)記的抗人IgE單克隆抗體，與檢測條在搖床上室溫下反應(yīng)半小時，洗膜，最后加入BCIP/NBT底物，避光反應(yīng)約十分鐘，洗膜，完全干燥后判定檢測的結(jié)果。檢測條的靈敏性、重復(fù)性和穩(wěn)定性好。與Allergyscreen過敏原檢測系統(tǒng)的檢測結(jié)果相比，兩種方法對雞蛋白、牛奶、花生、黃豆、螃蟹、蝦等大多數(shù)過敏原的檢出率無差異（P>0．05），對小麥和腰果的檢出率有差異（P<0．05）。兩種方法的陽性結(jié)