葡萄籽提取物對(duì)人骨肉瘤U2OS細(xì)胞生物學(xué)行為的影響.pdf

1、目的：研究不同濃度的葡萄籽提取物(Grape Seed Extract,GSE)對(duì)人骨肉瘤U2OS細(xì)胞生長、遷移的抑制作用及對(duì)人骨肉瘤U2OS細(xì)胞誘導(dǎo)凋亡的作用,并探討可能的作用機(jī)制。
　　方法：
　　(1)分別以不同濃度的葡萄籽提取物(0μg/ml、25μg/ml、50μg/ml、75μg/ml、100μg/ml)處理人骨肉瘤U2OS細(xì)胞,MTT檢測細(xì)胞增殖率。
　　(2)葡萄籽提取物處理人骨肉瘤U2OS細(xì)胞,Ann

2、exin V-FITC/PI雙染后,流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡率。
　　(3)細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)及transwell遷移實(shí)驗(yàn)分析葡萄籽提取物對(duì)人骨肉瘤U2OS細(xì)胞的遷移作用。
　　(4)提取細(xì)胞總RNA,經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄生成CDNA后,熒光定量PCR檢測葡萄籽提取物處理人骨肉瘤U2OS細(xì)胞后,有絲分裂紡錘體檢驗(yàn)點(diǎn)基因CDC20(cell division cycle20 homolog) mRNA表達(dá)水平的變化。
　　(5) Weste

3、rn-blotting檢測葡萄籽提取物處理人骨肉瘤 U2OS細(xì)胞后,有絲分裂紡錘體檢驗(yàn)點(diǎn)基因CDC20蛋白表達(dá)水平的變化。
　　結(jié)果：
　　(1) MTT結(jié)果顯示,葡萄籽提取物作用人骨肉瘤U2OS細(xì)胞后,可以明顯抑制其生長,且具有濃度依賴性。其IC50的濃度約為50μg/ml。
　　(2)流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示,葡萄籽提取物可以誘導(dǎo)U2OS細(xì)胞凋亡。細(xì)胞凋亡率隨著葡萄籽提取物作用時(shí)間延長而逐漸增加。50μg/ml葡萄籽提取

4、物處理細(xì)胞0h、8h、16h、24h的早期凋亡率分別為4.4％、20.1%、25.4%及34.2%。
　　(3)劃痕實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,與對(duì)照組相比,50μg/ml葡萄籽提取物作用U2OS細(xì)胞24小時(shí)后,細(xì)胞的遷移能力明顯減弱,說明葡萄籽提取物能夠抑制 U2OS細(xì)胞的遷移能力。Transwell遷移結(jié)果也顯示,50μg/ml葡萄籽提取物作用組細(xì)胞遷移能力明顯低于對(duì)照組細(xì)胞,說明葡萄籽提取物具有抑制U2OS細(xì)胞遷移的能力,這一結(jié)果與劃痕實(shí)

5、驗(yàn)結(jié)果一致。
　　(4)熒光定量PCR基因表達(dá)圖譜顯示,對(duì)照組、25μg/ml濃度組及50μg/ml濃度組的RQ值分別為1、0.65及0.45,25μg/ml濃度組及50μg/ml濃度組 CDC20 mRNA表達(dá)明顯低于對(duì)照組,50μg/ml濃度組最低,說明葡萄籽提取物能夠抑制U2OS細(xì)胞CDC20 mRNA的表達(dá)。
　　(5) Western結(jié)果顯示,25μg/ml濃度組及50μg/ml濃度組的灰度明顯低于對(duì)照組,50μg

6、/ml濃度組最低,由此可見,葡萄籽提取物具有抑制 U2OS細(xì)胞CDC20蛋白表達(dá)的作用。
　　結(jié)論：
　　(1)葡萄籽提取物具有抑制人骨肉瘤U2OS細(xì)胞增殖的作用,抑制作用具有濃度依賴性;葡萄籽提取物具有誘導(dǎo)人骨肉瘤U2OS細(xì)胞凋亡的作用;葡萄籽提取物具有抑制人骨肉瘤U2OS細(xì)胞遷移的作用;由此可見,葡萄籽提取物通過抑制U2OS細(xì)胞增殖、遷移,誘導(dǎo)U2OS細(xì)胞凋亡來發(fā)揮其抗骨肉瘤活性。
　　(2)葡萄籽提取物能明顯降低