紅三葉肽制劑的制備及其對(duì)小鼠免疫功能的影響研究.pdf

1、本文對(duì)以紅三葉草葉蛋白為原料采用酶解法制備紅三葉肽制劑的工藝進(jìn)行了系統(tǒng)的研究;同時(shí)，還系統(tǒng)研究了紅三葉肽制劑對(duì)小鼠免疫等功能的影響。主要結(jié)果如下： 1、通過(guò)加鹽量、絮凝溫度、絮凝時(shí)間和料水比四因素三水平的正交試驗(yàn)，得出影響紅三葉干草中葉蛋白提取的最主要因素是料水比。最佳工藝條件為加鹽量3％，料水比1：20，pH 3，70℃條件下絮凝20min。 2、試驗(yàn)選用7種蛋白酶，在各酶的最適反應(yīng)條件下進(jìn)行酶解試驗(yàn)，以水解度為指標(biāo)測(cè)

2、定各酶對(duì)紅三葉葉蛋白的水解效果。結(jié)果表明北京中性蛋白酶的水解效果符合試驗(yàn)要求，因此選用此酶。 3、選用最佳酶進(jìn)行水解單因素試驗(yàn)，測(cè)定水解各反應(yīng)條件(酶解PH值、溫度、酶活添加量、酶解時(shí)間、底物濃度)對(duì)水解度的影響，以確定該組合適宜的反應(yīng)條件。結(jié)果表明該酶的適宜反應(yīng)條件為：PH7.6，酶解溫度45℃，酶活添加量6000u每克 4、根據(jù)單因素試驗(yàn)結(jié)果，對(duì)溫度、pH值、酶活添加量、底物濃度這四個(gè)因素分三個(gè)水平進(jìn)行正交試驗(yàn)，從而得

3、到提取肽制劑的最佳條件。最終得到最佳提取條件為：水解溫度為45℃，pH值為7.6，酶活添加量為7000U/g，底物濃度為1％。 5、試驗(yàn)選用昆明種小鼠，隨機(jī)分到4個(gè)處理中。3個(gè)試驗(yàn)組分別灌胃濃度依次為5.0mg/mL，1.0mg/mL，0.1 mg/mL的肽制劑溶液，對(duì)照組灌胃生理鹽水。連續(xù)用藥2ld，試驗(yàn)結(jié)束后，立即對(duì)小鼠進(jìn)行免疫功能指標(biāo)的測(cè)定。試驗(yàn)結(jié)果表明:(1).低劑量組的脾臟指數(shù)極顯著高于對(duì)照組(P<0.01)，所有試驗(yàn)

4、組的胸腺指數(shù)均顯著提高(P<0.05)，其中高劑量組和中劑量組與對(duì)照組間差異極顯著(P<0.0 1)；(2).各個(gè)試驗(yàn)組腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞的吞噬百分率均顯著提高(P<0.05)，中劑量組的吞噬百分率和吞噬指數(shù)極顯著高于對(duì)照組(P<0.01)；(3).中劑量組和低劑量組的溶血素水平顯著高于對(duì)照組(P<0.05)，中劑量組與對(duì)照組差異極顯著(P<0.01)；(4).中劑量組T淋巴細(xì)胞百分比高于對(duì)照組，但是差異不顯著；(5).低劑量組小