膳食中不同比例n-6-n-3多不飽和脂肪酸構(gòu)成對(duì)乳腺癌發(fā)生發(fā)展的影響及分子機(jī)制研究.pdf

1、乳腺癌是嚴(yán)重危害婦女健康的常見惡性腫瘤，近年來發(fā)病率呈上升趨勢(shì)且趨向年輕化。大量研究和流行病學(xué)調(diào)查證實(shí)，腫瘤的發(fā)生、發(fā)展與膳食關(guān)系密切，尤其膳食脂肪與乳腺癌關(guān)系的研究一直倍受關(guān)注，不同種類的脂肪酸對(duì)乳腺癌的發(fā)生發(fā)展具有較為復(fù)雜的影響。 多不飽和脂肪酸(polyunsatirated fatty acid，PUFA)是指有2個(gè)或2個(gè)以上不飽和雙鍵結(jié)構(gòu)的脂肪酸，也稱多烯脂肪酸。根據(jù)第一個(gè)不飽和鍵位置不同，可分n-6(如豆油、玉米油等

2、)、n-3(如魚油等)兩大類。PUFA為人體重要的脂肪酸，在體內(nèi)發(fā)揮眾多生理作用，近年來發(fā)現(xiàn)它們與乳腺癌的發(fā)病關(guān)系極為密切。研究表明，n-6、n-3 PUFA對(duì)乳腺癌發(fā)病的影響具有不同影響，n-6 PUFA可促進(jìn)乳腺癌的發(fā)生發(fā)展，而n-3 PUFA則具有抗腫瘤及誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡的作用，其具體影響機(jī)制及作用差異性原因尚不明確。有研究顯示，脂肪組織中的n-6/n-3 PUFA比例而非這些脂肪酸的單一濃度對(duì)乳腺癌的發(fā)生具有更為重要的影響，低比

3、例的n-6/n-3 PUFA能降低慢性疾病和惡性腫瘤的發(fā)生，但至今尚不清楚膳食中何種比例的n-6、n-3 PUFA攝入才能有效預(yù)防乳腺癌的發(fā)生或者更好的預(yù)防乳腺癌的發(fā)生。因此，深入研究膳食脂肪，特別是不同比例n-6、n-3 PUFA攝入，與乳腺癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)系及其分子機(jī)制，對(duì)從膳食途徑預(yù)防乳腺癌具有重要的理論和現(xiàn)實(shí)意義。 乳腺癌的發(fā)病與體內(nèi)雌激素水平異常和雌激素信號(hào)通路的持續(xù)激活直接相關(guān)，雌激素水平的升高普遍被認(rèn)為是乳腺癌發(fā)病最

4、危險(xiǎn)因素之一。體內(nèi)雌激素水平的高低取決于雌激素合成與代謝之間的動(dòng)態(tài)平衡，雌激素的合成涉及眾多酶類，其中某些關(guān)鍵限速酶的活性及表達(dá)水平的高低對(duì)于雌激素的合成及體內(nèi)水平至關(guān)重要，如17 α-羥化酶(CYP17)和芳香化酶(CYP19)。眾所周知，腫瘤的發(fā)生本質(zhì)上源于癌基因或抑癌基因的突變或異常表達(dá)，乳腺癌易感(BRCA)基因和p53基因是兩個(gè)重要的抑癌基因，研究證實(shí)，兩者的突變或異常表達(dá)在乳腺癌的發(fā)生發(fā)展過程中扮演極為重要的角色。我們推測(cè)，

5、不同比例n-6/n-3 PUFA對(duì)乳腺癌的發(fā)生發(fā)展可能具有不同影響，而這種不同影響作用可能是通過調(diào)節(jié)雌激素水平或影響雌激素信號(hào)通路實(shí)現(xiàn)的，同時(shí)又可能與某些乳腺癌相關(guān)基因的突變或異常表達(dá)相關(guān)聯(lián)?；谝陨戏治?，本研究通過利用體內(nèi)化學(xué)致癌劑甲基亞硝基脲(MNU)誘導(dǎo)大鼠產(chǎn)生乳腺癌，復(fù)制乳腺癌動(dòng)物模型，采用RT-PCR、Western blotting等實(shí)驗(yàn)技術(shù)，觀察不同膳食多不飽和脂肪酸構(gòu)成比(1：1 n-6/n-3 PUFA、5：1 n-6

6、/n-3 PUFA、10：1 n-6/n-3 PUFA、n-6 PuFA)對(duì)大鼠乳腺癌發(fā)生、發(fā)展的影響，并從機(jī)體雌激素水平、雌激素合成、雌激素信號(hào)通路及乳腺組織中乳腺癌相關(guān)性抑癌基因的表達(dá)變化等方面，研究可能涉及的分子機(jī)制。 本研究主要實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下： 1．采用MNu一次性腹腔注射給藥，在清潔級(jí)SD雌性大鼠體內(nèi)成功復(fù)制大鼠乳腺癌模型，經(jīng)病理組織學(xué)檢查確認(rèn)誘發(fā)的乳腺腫瘤為乳腺導(dǎo)管癌。研究結(jié)果表明，不同比例n-6/n-3 PU

7、FA膳食構(gòu)成對(duì)MNU誘導(dǎo)的大鼠乳腺癌的發(fā)生具有不同影響，n-6 PUFA、5：1 n-6/n-3 PuFA和10：1 n-6/n-3 PUFA組具有較高的乳腺癌誘發(fā)率(10～12/13，83.33％～92.31％)和多發(fā)率，而1：1 n-6/n-3 PUFA組大鼠乳腺癌發(fā)生率(6/14，42.86％)顯著降低； 2．MNU誘導(dǎo)的乳腺癌大鼠，眶靜脈取血，放射免疫法測(cè)定血清雌二醇濃度，結(jié)果顯示，各組乳腺癌大鼠血清雌二醇水平以1：1

8、n-6/n-3 PUFA組最低，隨n-6/n-3比值增大而逐漸升高，其中1：1 n-6/n-3 PUFA組血清雌二醇水平顯著低于n-6 PUFA組； 3．RT-PCR檢測(cè)結(jié)果表明，不同比例n-6/n-3 PUFA膳食構(gòu)成對(duì)MNU誘導(dǎo)的乳腺癌大鼠乳腺組織中的雌激素合成關(guān)鍵酶CYP17和CYP19的表達(dá)具有不同影響，相對(duì)于n-6 PUFA、5：1 n-6/n-3 PUFA和10：1 n-6/n-3 PUFA組，1：1 n-6/n-3

9、 PUFA膳食構(gòu)成能夠顯著降低乳腺癌大鼠乳腺組織中CYP17和CYP19 mRNA的表達(dá)水平； 4．RT-PCR和Western blotting的檢測(cè)結(jié)果表明，乳腺癌大鼠乳腺組織中雌激素受體表達(dá)水平顯著升高，其中以n-6 PUFA組最高，隨n-6/n-3比值降低而逐漸下降，1：1n-6/n-3 PUFA組顯著低于n-6 PUFA組，可見膳食中不同比例的n-3、n-6 PUFA對(duì)ER的表達(dá)具有不同影響，1：1 n-6/n-3膳食

10、與n-6相比能夠顯著抑制MNU誘導(dǎo)的大鼠乳腺組織中ER表達(dá)的升高； 5．對(duì)各組乳腺癌大鼠乳腺組織中抑癌基因BRCA1和p53 mRNA及蛋白表達(dá)水平的檢測(cè)表明，乳腺癌大鼠乳腺組織中BRCA1表達(dá)有所降低，而不同比例的n-6/n-3PUFA對(duì)BRCA1的表達(dá)具有重要影響，1：1 n-6/n-3 PUFA膳食構(gòu)成能夠顯著抑制MNU誘導(dǎo)的乳腺癌大鼠乳腺組織中BRCA1表達(dá)的下降；野生型p53 mRNA在細(xì)胞內(nèi)半衰期短，實(shí)驗(yàn)檢測(cè)的p53

11、 mRNA為突變型p53，因此p53表達(dá)水平的升高表示p53突變率升高，本實(shí)驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果顯示，MNU誘導(dǎo)的乳腺癌大鼠乳腺組織中p53的表達(dá)升高，表明p53突變率增加，而1：1 n-6/n-3 PUFA膳食構(gòu)成能夠有效抑制乳腺癌大鼠乳腺組織中p53表達(dá)的升高。 綜上所述，本課題研究結(jié)果表明，不同比例的n-6/n-3 PUFA膳食構(gòu)成對(duì)MNU誘導(dǎo)的乳腺癌發(fā)生、發(fā)展具有不同影響，1：1 n-6/n-3 PuFA膳食構(gòu)成能夠有效降低腫瘤誘