LPS誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞活化過程中Pim-1表達(dá)及調(diào)控通路的研究.pdf

1、目的:探討LPS誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞活化過程中，Pim-1的動態(tài)表達(dá)情況及抑制PI3K、P38MAPK、MEK1/2、JAK2信號關(guān)鍵分子對巨噬細(xì)胞中Pim-1表達(dá)的影響。
　　方法:分離培養(yǎng)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞，隨機(jī)分為7組，各組分別用1μg/ml脂多糖(LPS)處理Oh，1h，2h，4h，8h，12h，24h，利用q-RTPCR、Western blot技術(shù)檢測各組巨噬細(xì)胞中Pim-1mRNA及Pim-1蛋白的動態(tài)表達(dá)情況。分離培養(yǎng)小鼠腹

2、腔巨噬細(xì)胞，隨機(jī)分為6組，各組分別用LPS，DMS0+LPS，LY294002(PI3K抑制劑)+LPS，SB203580(P38MAPK抑制劑)+LPS，AG490(MEK1/2抑制劑)+LPS，U0126(JAK2抑制劑)+LPS處理細(xì)胞，利用Western blot技術(shù)檢測各特異性信號分子抑制劑對LPS誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞中Pim-1蛋白表達(dá)的影響。
　　結(jié)果:①LPS刺激能迅速上調(diào)巨噬細(xì)胞中Pim-1mRNA水平，LPS刺激1h

3、后即可檢測到Pim-1mRNA表達(dá)增高，Pim-1mRNA高峰在LPS刺激2h出現(xiàn)，約是對照組的6倍，LPS刺激12h后Pim-1mRNA即回落至基礎(chǔ)水平。②LPS刺激能迅速上調(diào)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞中Pim-1蛋白的表達(dá)，LPS刺激1h后即可檢測到Pim-1蛋白表達(dá)增高;Pim-1蛋白水平在LPS刺激1-8h后維持增高水平，LPS刺激12h后Pim-1蛋白水平即回落至基礎(chǔ)水平。③PI3K抑制劑，P38MAPK抑制劑，MEK1/2抑制劑，JA

4、K2抑制劑分別下調(diào)巨噬細(xì)胞中p-AKT，p-P38，p-ERK，p-JAK2的表達(dá)，PI3K、P38MAPK、MEK1/2、JAK特異性抑制劑均能下調(diào)LPS誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞中Pim-1蛋白表達(dá)水平。
　　結(jié)論:①巨噬細(xì)胞中Pim-1mRNA及蛋白在LPS刺激后迅速表達(dá)上調(diào)，體現(xiàn)Pim-1早期即刻基因的特性。Pim-1在巨噬細(xì)胞早期活化過程中發(fā)揮調(diào)節(jié)作用。②PI3K/AKT、P38MAPK、MEK/ERK、JAK2/STATs信號通路