苦參素對人胃癌細(xì)胞系MGC-803增殖抑制作用及機(jī)制研究.pdf

1、本文研究目的：通過體外實(shí)驗(yàn)，運(yùn)用現(xiàn)代分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)，探討苦參素抗胃癌作用靶點(diǎn)及機(jī)制，為臨床運(yùn)用苦參素治療胃癌提供必要的理論依據(jù)。 研究方法： 1.用不同劑量的苦參素注射液，分別作用于人胃癌細(xì)胞系MGC-80312h、24h、36h、48h，采用四甲基偶氮唑鹽光吸收法(MTT法)檢測MGC-803細(xì)胞的增殖活性；通過計(jì)算細(xì)胞增殖抑制率、藥物半數(shù)抑制濃度(IC50)、繪制細(xì)胞增殖抑制曲線等，綜合分析苦參素對人胃細(xì)胞系MG

2、C-803細(xì)胞增殖活性的影響。 2.應(yīng)用倒置顯微鏡和透射電子顯微鏡技術(shù)，觀察苦參素作用于人胃癌細(xì)胞系MGC-803后，細(xì)胞生長狀況及形態(tài)學(xué)改變。 3.應(yīng)用流式細(xì)胞儀，對細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡率以及細(xì)胞內(nèi)相關(guān)蛋白(PCNA、Bcl-2、Bax、CyclinD1和CDK4)表達(dá)水平進(jìn)行分析，探討苦參素對人胃細(xì)胞系MGC-803增殖抑制的作用機(jī)制以及與基因表達(dá)調(diào)控的關(guān)系。 研究結(jié)果： 1.MTT檢測結(jié)果顯示：苦參素

3、對人胃癌細(xì)胞系MGC-803具有顯著的細(xì)胞殺傷作用和細(xì)胞生長抑制作用，與陰性對照組比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.000＜0.05)；且具有明顯的劑量效應(yīng)關(guān)系，直線回歸方程為：Y=8.313-10.469X,其中，r為-0.971，P=0.000＜0.05。 2.倒置顯微鏡和透射電子顯微鏡觀察結(jié)果顯示：苦參素處理24h后，可見典型的細(xì)胞凋亡變化，細(xì)胞體積縮小，細(xì)胞核染色質(zhì)聚集在核膜下，使核膜厚薄不均或呈半月形；另外，還可見部分

4、細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)破壞，胞漿內(nèi)容物外溢，細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)內(nèi)明顯水腫等變化。 3.流式細(xì)胞儀檢查細(xì)胞周期、凋亡指數(shù)以及細(xì)胞增殖、凋亡和細(xì)胞周期調(diào)控相關(guān)基因蛋白表達(dá)結(jié)果顯示：1)苦參素處理24小時后，G0/G1期細(xì)胞明顯增多，與陰性對照組相比，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；S期細(xì)胞明顯減少，與陰性對照組比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。2)細(xì)胞凋亡指數(shù)與陰性對照組相比隨劑量而增加，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。3)細(xì)胞內(nèi)P

5、CNA、CyclinD1、CDK4和Bcl-2表達(dá)量明顯減少，Bax表達(dá)量顯著增加，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。 研究結(jié)論： 1.苦參素對人胃癌細(xì)胞系MGC-803具有顯著的增殖抑制作用，其作用具有劑量和時間效應(yīng)。 2.苦參素對人胃癌細(xì)胞系MGC-803的增殖抑制作用，主要表現(xiàn)在抑制增殖、促進(jìn)凋亡和直接殺傷三個方面。 3.苦參素對人胃癌細(xì)胞系MGC-803增殖抑制的主要作用機(jī)制與細(xì)胞