離體培養(yǎng)紅豆杉細胞次生代謝啟動機制研究.pdf

1、華中理工大學博士學位論文離體培養(yǎng)紅豆杉細胞次生代謝啟動機制研究姓名：蘇湘鄂申請學位級別：博士專業(yè)：生物醫(yī)學工程指導教師：梅興國2000.4.1華中理工大學博士學位論文和紫杉醇含量也明顯高于原型。4借鑒刺激動物免疫產(chǎn)生抗體的方法，設(shè)計了小劑量連續(xù)誘導方案，并且比較了小劑量連續(xù)誘導與一次性大劑量加入誘導子在’細胞活力、H20，含量、POD活力、生物量和紫杉醇含量等方面的差異。結(jié)果表明：(1)小劑量連續(xù)誘導具有減輕一次性大劑量添加誘導子對細胞

2、的毒害作用，并可獲得更強的誘導效應(yīng)的優(yōu)點。(2)多種誘導子組合使用對細胞生長有影響，但對紫杉醇單位含量的提高更有利。5測定了紅豆杉細胞一個生長周期中的分裂指數(shù)，研究了處于不同生長周期時相的紅豆杉細胞經(jīng)誘導后生活力、生物量、紫杉’醇含量及POD活力、H20，含量等幾個與次生代謝有關(guān)的生理生化指標的差異，對細胞生長周期時相、細胞分裂指數(shù)與紫杉醇合成的關(guān)系作了初步探討。結(jié)果表明：細胞的分裂高峰時期在6—8天，而在正處于分裂高峰期的第7天加入誘

3、導子，細胞生活力、POD活力、H，0，含量、紫杉醇含量都是最高的，由此可見，處于分裂相的細胞有可能對誘導子更敏感。6對低溫誘導同步化的方法及低溫誘導同步化對紅豆杉細胞√次生代謝的影響進行了研究，結(jié)果表明：細胞經(jīng)2。C處理12h，恢復12h可提高分裂指數(shù)115％，經(jīng)6‘C處理24h，恢復12h可將分裂指數(shù)提高776％2。C處理降低了細胞活力，細胞褐化嚴重，紫杉醇含量不高。6。C處理顯著提高了細胞活力和紫杉醇含量。7在本實驗室以前工作的基礎(chǔ)

4、上，選取九種前體和兩種旁路抑制劑，各取兩種濃度水平，以紫杉醇含量作為檢測指標進行11因素二水平的正交實驗來分析這11種因素對紫杉醇含量的影響，獲得了一最優(yōu)方案，并對這一方案在15L反應(yīng)器中進行了檢驗。結(jié)果表明：前體中D一苯丙氨酸、苯異絲氨酸、苯甲酸鈉、甲瓦龍酸0內(nèi)酯、檸檬酸銨、乙酸鈉對紫杉醇合成影響極為顯著，0【一苯丙氨酸、草酸銨作用顯著，甘氨酸的作用不顯著兩種代謝抑制劑中，肉桂酸對紫杉醇合成影響顯著，ccc則不顯著在15L機械攪拌式、