結(jié)直腸癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)分子的定量蛋白質(zhì)學(xué)研究.pdf

1、復(fù)旦大學(xué)碩士學(xué)位畢業(yè)論文結(jié)直腸癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)分子的定量蛋白質(zhì)組學(xué)研究碩士學(xué)位論文結(jié)直腸癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)分子的定量蛋白質(zhì)學(xué)研究系:腫瘤醫(yī)院業(yè):腫瘤學(xué)院專碩士研究生:黃利勇研究生導(dǎo)師:蔡三軍教授導(dǎo)師組成員:徐燁副教授陸豪杰副教授蔡國(guó)響博士資金資助:上海市科委重大項(xiàng)目(編號(hào):07dz19505)復(fù)旦大學(xué)碩士學(xué)位畢業(yè)論文結(jié)直腸癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)分子的定量蛋白質(zhì)組學(xué)研究中文摘要目的:原發(fā)性腫瘤發(fā)生轉(zhuǎn)移是結(jié)直腸癌治療失敗的最主要原因，其最常見的轉(zhuǎn)移

2、方式是通過淋巴道進(jìn)行腫瘤細(xì)胞播散一一淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移?；颊呷绨l(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，其長(zhǎng)期生存概率將會(huì)明顯低于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者，并且淋巴結(jié)是否發(fā)生轉(zhuǎn)移會(huì)直接對(duì)腫瘤分期、預(yù)后判斷及臨床治療方案的選擇提供重要信息。為了研究結(jié)直腸癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制，以提高對(duì)結(jié)直腸癌的診斷及治療效果，我們采用定量蛋白質(zhì)組學(xué)及相關(guān)分子生物學(xué)技術(shù)為研究方法，對(duì)結(jié)直腸癌伴有和不伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的原發(fā)癌組織進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究，依此為篩選潛在結(jié)直腸癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移分子標(biāo)志物及為病人的臨床個(gè)體

3、化治療提供依據(jù)。材料與方法:病人及標(biāo)本:實(shí)驗(yàn)所需的144例標(biāo)本均來(lái)自復(fù)旦大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院上海市腫瘤醫(yī)院大腸外科。所有病人均簽署過知情同意書，且在手術(shù)前均未接受過化療放療等相關(guān)抗腫瘤治療。標(biāo)本的病理診斷標(biāo)準(zhǔn)參照美國(guó)抗癌協(xié)會(huì)《腫瘤分期》(第六版，2002年)。在蛋白分子的篩查及驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)中，我們搜集了32例2009年于我院行結(jié)直腸癌根治性手術(shù)的新鮮標(biāo)本，根據(jù)術(shù)后病理結(jié)果分成淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陰性及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽(yáng)性兩組，每組各16例。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陰性組中的

4、每例標(biāo)本的淋巴結(jié)檢出數(shù)不少于12枚。32例病人均無(wú)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。對(duì)篩查出的潛在分子標(biāo)志物的進(jìn)一步臨床研究，我們搜集了2004年1月至6月于我院手術(shù)的112例結(jié)直腸癌病人的石蠟標(biāo)本進(jìn)行免疫組織化學(xué)檢查。此研究項(xiàng)目經(jīng)過上海市腫瘤醫(yī)院倫理委員會(huì)審核通過。蛋白質(zhì)樣品制備、甲基化穩(wěn)定同位素標(biāo)記及二維液相色譜結(jié)合串聯(lián)質(zhì)譜:32例新鮮標(biāo)本分別提取總蛋白、純化、定量。來(lái)自淋巴結(jié)陰性組及陽(yáng)性組的各16例樣本分別等量混合成兩個(gè)樣本(即淋巴結(jié)陰性組和淋巴結(jié)陽(yáng)性組

5、)。兩組樣本各取100微升，在經(jīng)胰蛋白酶消化后分別進(jìn)行穩(wěn)定同位素標(biāo)一記:淋巴結(jié)陽(yáng)性組行do甲基酷化標(biāo)一記，陰性組行d3甲基醋化標(biāo)記。兩組樣品最后混合除鹽，經(jīng)二維高效液相色譜分離后進(jìn)行串聯(lián)質(zhì)譜分析(LTQbitraP)。數(shù)據(jù)分析:所產(chǎn)生的質(zhì)譜圖用Bi。wks3.3.1進(jìn)行處理，產(chǎn)生不同的峰面積圖。使用SHQU以T算法搜尋國(guó)際蛋白索引(1巴3.43)得到相對(duì)應(yīng)蛋白質(zhì)名。蛋白差異表達(dá)2.5倍，尸0.05被設(shè)定為明顯差異表達(dá)蛋白。免疫印跡:32