Asoprisnil影響著床窗期孕小鼠子宮內(nèi)膜容受性的機制研究.pdf

1、第一部分、Asoprisnil對著床窗期孕小鼠血清雌孕激素水平和子宮內(nèi)膜組織形態(tài)的影響
　　目的：通過觀察Asoprisnil對孕小鼠著床窗期的血清雌二醇(Estradiol,E2)、孕酮(Progesterone,P)水平的影響以及對子宮內(nèi)膜組織形態(tài)的影響，探討其對孕小鼠著床窗期子宮內(nèi)膜容受性的影響。
　　方法：領(lǐng)取健康性成熟未生育的雌性昆明小鼠（周齡8-12周、體重25±5g）后，讓它們與健康性成熟雄性小鼠交配，把查到陰

2、栓時記為孕第1天。將孕小鼠隨機分成3組，分別為Asoprisnil低（5μg/g）、高（20μg/g）劑量組和賦形劑為對照組，于小鼠孕第1～3天灌胃給藥，1次/日，對照組小鼠用1％的羥甲基纖維素鈉（Sodium Carboxymethyl Cellulose,CMCNa）替代，于小鼠孕第5天上午10%水合氯醛麻醉后，分別取血和子宮組織，然后通過化學(xué)發(fā)光法檢測血清雌二醇及孕酮水平，4%中性多聚甲醛固定后，然后用蘇木素-伊紅（Hematox

3、ylin-Eosin，HE)染色，再利用普通光學(xué)顯微鏡觀察子宮內(nèi)膜組織形態(tài)結(jié)構(gòu)的變化。
　　結(jié)果：
　　1、Asoprisnil對孕小鼠著床窗期血清雌二醇和孕酮水平的影響：①Asoprisnil低、高劑量組孕小鼠血清雌二醇水平分別為21.00±6.76pg/ml、20.56±6.01pg/ml，與賦形劑對照組（20.57±5.62pg/ml）比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義；②Asoprisnil低、高劑量組孕小鼠血清孕酮水平分別為2

4、5.65±4.11ng/ml、20.31±3.46ng/ml，均明顯低于對照組（28.05±7.69ng/ml），且三組間兩兩比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。
　　2、Asoprisnil對孕小鼠著床窗期的子宮內(nèi)膜組織形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響：HE染色結(jié)果顯示對照組著床窗期小鼠的子宮內(nèi)膜腺體較大且折疊彎曲，腔上皮細(xì)胞多為單層柱狀細(xì)胞排列，基質(zhì)細(xì)胞較大且結(jié)構(gòu)排列松散，內(nèi)膜腺體豐富；Asoprisnil低、高劑量組子宮內(nèi)膜腺體增生不明顯

5、，腔上皮細(xì)胞層數(shù)較多，基質(zhì)細(xì)胞變小且排列緊湊。
　　結(jié)論：Asoprisnil不影響孕小鼠著床窗期血清雌二醇的水平，其通過降低孕鼠血清孕酮水平，影響子宮內(nèi)膜由增殖期向分泌期的充分轉(zhuǎn)化及蛻膜化，進(jìn)而降低子宮內(nèi)膜容受性，拮抗孕卵的順利著床。
　　第二部分、Asoprisnil對著床窗期孕小鼠子宮內(nèi)膜HOXA10和LIF表達(dá)的影響
　　目的：通過檢測同源框基因（Homeobox gene，HOX）A10和白血病抑制因子（Le

6、ukemia Inhibitory Factor，LIF）在蛋白翻譯水平的變化，以及HOXA10 mRNA和LIF mRNA在基因轉(zhuǎn)錄水平的表達(dá)，對Asoprisnil影響孕小鼠著床窗期子宮內(nèi)膜容受性的機制進(jìn)行研究。
　　方法：領(lǐng)取健康性成熟未生育的雌性昆明小鼠（周齡8-12周、體重25±5g后），讓它們與健康性成熟雄性小鼠交配，把查到陰栓時記為孕第1天。將孕小鼠隨機分成3組，分別為Asoprisnil低（5μg/g）、高（20μ

7、g/g）劑量組及對照組，于小鼠孕第1～3天灌胃給藥，1次/日，對照組小鼠用1%CMCNa替代，于孕第5天上午小鼠10%水合氯醛麻醉后，取子宮及子宮內(nèi)膜組織，通過免疫組織化學(xué)（Immunohistochemistry,IHC）S-P法和免疫熒光（Immunofluorescence,IF）法檢測子宮內(nèi)膜HOXA10及LIF蛋白的表達(dá)，實時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（Real-Time Polymerase Chain Reaction，RT-P

8、CR）法檢測HOXA10 mRNA和LIF mRNA在子宮內(nèi)膜的表達(dá)變化。
　　結(jié)果：
　　1、Asoprisnil對孕小鼠著床窗期的子宮內(nèi)膜HOXA10蛋白和LIF蛋白表達(dá)的影響：免疫組化和免疫熒光結(jié)果均顯示，著床窗期小鼠子宮內(nèi)膜中腔上皮細(xì)胞、腺體和基質(zhì)細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)均可見HOXA10蛋白及LIF蛋白表達(dá)；此外，IHC半定量結(jié)果顯示：①Asoprisnil低、高劑量組子宮內(nèi)膜HOXA10表達(dá)強度用平均光密度值（Average

9、Integral Optical Density，AIOD）表示，分別為0.21±0.02、0.19±0.02，其中Asoprisnil高劑量組對于對照組（0.22±0.01）的差異是具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。② Asoprisnil低、高劑量組子宮內(nèi)膜 LIF表達(dá)強度（AIOD）分別為0.16±0.02、0.14±0.02，其中Asoprisnil高劑量組對于對照組（0.17±0.02）的差異是具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。<

10、br>　　2、Asoprisnil對著床窗期孕小鼠子宮內(nèi)膜HOXA10 mRNA和LIF mRNA表達(dá)的影響：①Asoprisnil低、高劑量組HOXA10mRNA相對表達(dá)量分別為0.12±0.04、0.05±0.02，當(dāng)與對照組（0.28±0.07）相比較后，差異是有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。②Asoprisnil低、高劑量組LIF mRNA相對表達(dá)量分別為0.08±0.03、0.06±0.03，當(dāng)與對照組（0.29±0.06）相比