乳源抗菌-免疫調(diào)節(jié)融合肽對(duì)人卵巢癌細(xì)胞的影響.pdf

1、目的：探討乳源抗菌-免疫調(diào)節(jié)融合肽(antibacterial-immunomodulating fusion peptide,AIFP)對(duì)卵巢癌細(xì)胞增殖、凋亡和周期的影響,探究其可能的分子機(jī)制,并初步研究其抗菌活性。
　　方法：免疫熒光染色鑒定原代培養(yǎng)細(xì)胞的純度;MTT法檢測(cè)AIFP對(duì)卵巢癌細(xì)胞增殖的影響;流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè) AIFP對(duì)卵巢癌細(xì)胞凋亡和周期的影響;RT-PCR和Western Blot檢測(cè)AIFP對(duì)卵巢癌細(xì)胞Akt

2、、CDC25C、cyclinB1、bax和Bcl-xl基因和相關(guān)蛋白表達(dá)水平影響;細(xì)菌生長(zhǎng)曲線的繪制和紙片瓊脂糖擴(kuò)散法檢測(cè)AIFP的抗菌活性。
　　結(jié)果：免疫熒光鑒定原代卵巢癌細(xì)胞細(xì)胞純度的鑒定結(jié)果顯示,原代卵巢癌細(xì)胞的純度可達(dá)84.61％,可以進(jìn)行下一步實(shí)驗(yàn)。MTT法顯示,AIFP作用于SKOV3細(xì)胞24、48和72 h的ID50分為2.75×10-4 mg/ml、3.96×10-5 mg/ml和3.96×10-6 mg/ml,

3、與對(duì)陰性照組相比較,具有時(shí)間和劑量依賴性,流式細(xì)胞技術(shù)結(jié)果顯示:AIFP的濃度為5×10-3 mg/ml,作用于原代卵巢癌細(xì)胞24、48和72h的凋亡率分別可達(dá)6.10%、19.31%和40.63%,與陰性對(duì)照組相比較差異用統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)。AIFP的濃度為×10-3 mg/ml,作用于SKOV3細(xì)胞24、48和72h的凋亡率分別可為2.82%、7.82%和29.81%,與陰性對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。用5×

4、10-3mg/mlAIFP作用于SKOV3細(xì)胞24、48和72h后G2/M期延長(zhǎng)(分別為7.15%、8.81%、12.00%)與空白對(duì)照組(2.32%、2.93%、3.02%)比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,用5×10-6 mg/ml AIFP作用于SKOV3細(xì)胞24、48和72h后,G2/M期延長(zhǎng)(分別為5.25%、6.90%、8.14%),與空白對(duì)照組(2.32%、2.93%、3.02%)比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。PCR實(shí)驗(yàn)顯示,AIFP作用于卵

5、巢癌細(xì)胞后,Akt、CDC25C、cyclinB1、BcL-xl基因的表達(dá)水平下調(diào),Bax的表達(dá)水平上調(diào),與空白對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。Western Blot實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,Akt、CDC25C、cyclinB1和BcL-xl蛋白表達(dá)水平上升,Bax蛋白表達(dá)水平下降的,與空白對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。AIFP組大腸桿菌生長(zhǎng)曲線的穩(wěn)定區(qū)段位于對(duì)照組的下方,表明細(xì)菌生長(zhǎng)受到抑制。紙片瓊脂糖擴(kuò)散實(shí)驗(yàn)中,A

6、IFP組出現(xiàn)抑菌環(huán),抑菌環(huán)的直徑小于氨芐青霉素組,但明顯大于空白對(duì)照組,且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　結(jié)論：1、成功培養(yǎng)了原代卵巢癌細(xì)胞,經(jīng)鑒定其純度可以進(jìn)行下一步實(shí)驗(yàn)。
　　2、AIFP能夠抑制原代卵巢癌細(xì)胞和SKOV3細(xì)胞株的增殖。
　　3、AIFP能夠促進(jìn)卵巢癌細(xì)胞的凋亡。
　　4、AIFP對(duì)卵巢癌細(xì)胞周期的影響表現(xiàn)在其可以將卵巢癌細(xì)胞周期阻止在G2/M期
　　5、AIFP可以下調(diào)卵巢癌細(xì)