尼泊爾鳶尾異黃酮在大鼠體內(nèi)外的代謝研究.pdf

1、尼泊爾鳶尾異黃酮是葛花中的主要異黃酮成分之一，具有廣泛的藥理活性如抗炎、抗氧化、抑菌、抗腫瘤、雌激素樣作用、保護(hù)酒精中毒引起的肝損傷等。實(shí)驗(yàn)室前期對野葛花(P.Puerariaflower)中主要的異黃酮成分葛花苷做了詳細(xì)深入的研究，然而，其苷元尼泊爾鳶尾異黃酮的體內(nèi)外代謝研究還未見報(bào)道。本研究中，利用UHPLC/Q-TOFMS方法研究了尼泊爾鳶尾異黃酮在大鼠體內(nèi)外的代謝，具體的研究分為以下幾個(gè)部分。
　　1.利用萃取、活性炭吸附

2、、重結(jié)晶等方法從野葛花的乙醇提取物中分離得到尼泊爾鳶尾異黃酮單體，并用TLC、HPLC-UV、UHPLC/Q-TOFMS、H-NMR等方法對尼泊爾鳶尾異黃酮進(jìn)行定性鑒別和純度檢測，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，所得淡黃色結(jié)晶狀粉末為尼泊爾鳶尾異黃酮，純度大于95％，為后續(xù)尼泊爾鳶尾異黃酮在大鼠體內(nèi)外代謝提供物質(zhì)基礎(chǔ)。
　　2.采用UHPLC/Q-TOFMS方法研究了尼泊爾鳶尾異黃酮在大鼠體內(nèi)的代謝，口服灌胃給予正常大鼠100mg/kg的尼泊爾鳶尾異黃

3、酮，按照時(shí)間點(diǎn)和時(shí)間段采集大鼠血漿、膽汁、尿液和糞便樣品，分別利用沉淀蛋白、固相萃取(SPE)和超聲提取的方法處理生物樣品。利用實(shí)驗(yàn)室前期分離得到的標(biāo)準(zhǔn)品、化合物的極性和質(zhì)譜裂解規(guī)律等方法，共檢測并鑒定到尼泊爾鳶尾異黃酮在大鼠體內(nèi)46個(gè)代謝物。尼泊爾鳶尾異黃酮在大鼠體內(nèi)的代謝途徑主要包括脫羰基、還原、去甲基、去甲氧基、去羥基化、羥基化、硫酸化和葡萄糖醛酸化等。同時(shí)，也給出了不同類型的代謝物在各自生物基質(zhì)中的相對含量。原型是主要的排泄形式

4、，在尿液和糞便中分別占28％和80％。作為多羥基異黃酮，尼泊爾鳶尾異黃酮在血漿中的含量僅為2％，而以Ⅱ相代謝物形式為主，尼泊爾鳶尾異黃酮-7-O-葡萄糖醛酸苷是尼泊爾鳶尾異黃酮在體內(nèi)的主要形式，在血漿和膽汁中分別占65％和95％。
　　3.葛花苷和尼泊爾鳶尾異黃酮是葛花中的主要異黃酮成分，且都有廣泛的藥理活性。腸道菌群在異黃酮代謝中起重要作用，并且對于口服藥物的活性起重要作用。目前為止，葛花苷和尼泊爾鳶尾異黃酮體外代謝還沒有深入的

5、研究報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)采用UHPLC/Q-TOFMS方法用以檢測葛花苷和尼泊爾鳶尾異黃酮在人和大鼠腸道菌群厭氧培養(yǎng)之后的代謝輪廓圖。菌群培養(yǎng)代謝物在厭氧條件下培養(yǎng)48h之后處理并檢測。結(jié)果共檢測到包括原型在內(nèi)的17個(gè)代謝物，其中水解、去羥基化、去甲氧基、去甲基、羥基化、脫羰基和還原是葛花苷和尼泊爾鳶尾異黃酮在人和大鼠腸道菌群中檢測到的代謝途徑。尼泊爾鳶尾異黃酮在人和大鼠糞便中的轉(zhuǎn)化率分別為8.57％和6.51％，鷹嘴豆芽素A(biochani

6、nA，BiA)是尼泊爾鳶尾異黃酮相對主要的代謝物，其在人和大鼠菌群轉(zhuǎn)化代謝物中分別為3.68％和4.25％。葛花苷在人和大鼠腸道菌群中的轉(zhuǎn)化率分別為99.92％和98.54％，主要代謝物尼泊爾鳶尾異黃酮分別占人和大鼠腸道菌群總代謝物的89.58％和89.38％。此研究不僅給出了葛花苷和尼泊爾鳶尾異黃酮的代謝途徑，還建立了一種簡便、快速、靈敏、價(jià)格低廉的化合物腸道菌群生物轉(zhuǎn)化代謝研究方法。
　　4.以大豆苷元為內(nèi)標(biāo)，采用UHPLC/

7、Q-TOFMS方法研究大鼠口服給予尼泊爾鳶尾異黃酮100mg/kg后，大鼠血漿中原型及代謝物的藥代動(dòng)力學(xué)。采用乙腈沉淀蛋白法處理血漿樣品，通過與標(biāo)準(zhǔn)品比對、洗脫順序及質(zhì)譜碎片，共檢測到包括原型在內(nèi)的14個(gè)代謝物。研究了3個(gè)主要葡萄糖醛酸化代謝物鳶尾黃素-7-O-葡萄糖醛酸苷(tectorigenin-7-O-glucuronide，Te-7G)，鷹嘴豆素A-6-O-葡萄糖醛酸苷(6-hydroxybiochaninA-6-O-glucu

8、ronide，6-OH-BiA-6G)，尼泊爾鳶尾異黃酮-7-O-葡萄糖醛酸苷(irisolidone-7-O-glucuronide，Ir-7G)，3個(gè)硫酸化代謝物鳶尾黃素-7-O-葡萄糖醛酸4'-O-硫酸酯（Tectorigenin-7-O-glueuronide-4'-O-sulfate，Te-7S-4'S），鳶尾黃素-7-O-硫酸酯（tectorigenin-7-O-sulfate，Te-7S）和尼泊爾鳶尾異黃酮-7-O-硫酸酯

9、(irisolidone-7-O-sulfate，Ir-7S)，以及苷元鳶尾黃素(tectorigenin，Te)和原型尼泊爾鳶尾異黃酮(irisolidone，Ir)的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，Te-7S-4'S，Te-7G，Te-7S，6-OH-BiA-6G，Ir-7G，Te，Ir-7S，Ir的Cmax和Tmax分別為0.297mol/L，10.3h，0.199mol/L，21.67h，0.154mol/L，8.00h，4,10mo

10、l/L,15.3h,10.7mol/L,9.71h,0.918mol/L,11.3h,0.150mol/L,8.67h,0.843mol/L，9.67h。Ir-7G和6-OH-BiA-6G是大鼠口服尼泊爾鳶尾異黃酮后血漿中的主要代謝物，分別占總代謝物的55.8％和31.5％，與之前的研究大鼠口服葛花苷的代謝類似;葛花苷代謝物的Tmax在34～38h，遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于尼泊爾鳶尾異黃酮的達(dá)峰時(shí)間(均小于21h)，說明苷元在大鼠體內(nèi)吸收更快。比較了血