纖維蛋白膠攜載的粒細(xì)胞集落刺激因子促進(jìn)大鼠缺血后肢血管再生的作用.pdf

1、目的：研究肌注纖維蛋白膠攜載的粒細(xì)胞集落刺激因子(Gel+G-CSF)對(duì)大鼠外周血白細(xì)胞總數(shù)和缺血下肢血管再生的影響。
　　 材料與方法：
　　 1、于EP管中將纖維蛋白膠主體(加入了G-CSF)和催化劑混合制成凝膠塊，加入PBS液，于37℃下恒溫孵育。分別于24、48、72、96 h各時(shí)間點(diǎn)用ELISA試劑盒檢測(cè)PBS釋放液中G-CSF濃度，計(jì)算G-CSF的累積釋放率。
　　 2、雄性SD大鼠30只，制成大鼠后

2、肢缺血模型，成模后隨機(jī)分3組：Gel+G-CSF組(n=10)、G-CSF組(n=10)和PBS組(n=10)，分別肌肉注射Gel+G-CSF、G-CSF和PBS。于造模術(shù)前及術(shù)后第1、3、5、7天計(jì)數(shù)外周血白細(xì)胞總數(shù)，于造模后的第1周和第4周每組分別處死5只大鼠，取肌組織冰凍切片行堿性磷酸酶染色、蘇術(shù)素染色、α-SMA和VEGF免疫組化染色，觀察毛細(xì)血管、細(xì)胞浸潤(rùn)情況、α-SMA陽(yáng)性血管和VEGF表達(dá)情況；計(jì)數(shù)毛細(xì)血管和α-SMA陽(yáng)性

3、血管密度。
　　 結(jié)果：
　　 1、Gel+G-CSF體外釋放情況：Gel+G-CSF在24h、48h和72h的累計(jì)釋放率約52.5±4.50％、76.3±4.47％、87.9±4.38％，Gel±G-CSF在72h內(nèi)逐漸緩釋出大部分的G-CSF。
　　 2、外周血白細(xì)胞數(shù)的變化：Gel+G-CSF組外周血白細(xì)胞總數(shù)在術(shù)后第1天達(dá)峰值(14.69±1.11×109/L)且明顯低于G-CSF組在術(shù)后第3天達(dá)到的峰值

4、(21.00±2.26×109/L)。
　　 3、促血管再生作用：Gel+G-CSF組(686±108/mm2)的毛細(xì)血管密度明顯高于G-CSF組(491±110/mm2)和PBS組(252±78/mm2)，P<0.05。Gel+G-CSF組(6.1±0.8/mm2)的α-SMA陽(yáng)性血管密度明顯高于PBS組(2.6±1.3/mm2)，P<0.05。
　　 4、促細(xì)胞浸潤(rùn)及VEGF表達(dá)作用：Gel+G-CSF組肌組織內(nèi)浸潤(rùn)