腦缺血后新生神經(jīng)元的遷移及其樹突生長(zhǎng)研究.pdf

1、目的：正常成年鼠腦內(nèi)SVZ區(qū)和DG區(qū)不斷產(chǎn)生神經(jīng)干細(xì)胞，新生神經(jīng)干細(xì)胞能夠增殖、遷移、分化發(fā)育并整合進(jìn)入已有的神經(jīng)環(huán)路，這一過程對(duì)于維持生命體的正常生理活動(dòng)有重要的意義。我們重點(diǎn)研究在腦缺血再灌后，SVZ和 DG區(qū)的神經(jīng)發(fā)生。我們以前的研究已經(jīng)表明，腦缺血再灌后，新生的神經(jīng)干細(xì)胞會(huì)向缺血區(qū)遷移，但是腦缺血再灌后缺血區(qū)的這些神經(jīng)干細(xì)胞是否來源 SVZ區(qū)，DG區(qū)的神經(jīng)發(fā)生是否和正常鼠腦內(nèi)一致還需要進(jìn)一步研究，本文將重點(diǎn)研究在腦缺血再灌這一病

2、理狀態(tài)下，SVZ區(qū)神經(jīng)干細(xì)胞的遷移情況以及 DG區(qū)新生神經(jīng)干細(xì)胞的發(fā)育情況。
　　方法：利用脂質(zhì)體將pMT44逆轉(zhuǎn)錄病毒載體導(dǎo)入GP2-293中構(gòu)建出一定滴度的逆轉(zhuǎn)錄病毒。這種逆轉(zhuǎn)錄病毒只能夠侵染增殖分化的細(xì)胞，且能穩(wěn)定表達(dá)紅色熒光蛋白，利用逆轉(zhuǎn)錄病毒的這種特性，我們可以選擇性的標(biāo)記出SVZ區(qū)的神經(jīng)干細(xì)胞。線栓法制作大鼠腦缺血模型，再灌3d后，側(cè)腦室注射病毒，以標(biāo)記增殖細(xì)胞.分注射病毒后3d、7d、14d后，灌流取材切片，并用免疫

3、熒光染色法加強(qiáng)標(biāo)記，在免疫熒光顯微鏡下觀察結(jié)果。同樣的方法我們海馬注射病毒可以標(biāo)記出海馬的新生神經(jīng)干細(xì)胞，給予reelin抑制劑后采用免疫熒光法觀察海馬區(qū)神經(jīng)干細(xì)胞的發(fā)育情況，采用水迷宮從行為學(xué)上檢測(cè)大鼠的記憶力。
　　結(jié)果：⑴采用轉(zhuǎn)染后濃縮上清的方法可以得到1×107的病毒上清；⑵腦缺血再灌后，注射病毒后的3d、7d、14d，側(cè)腦室角的mcherry（+）細(xì)胞數(shù)目和遷移距離顯著增加；⑶腦缺血再灌后17d，給予reelin抑制劑R